美國藥典(USP)對宿主細胞殘留DNA檢測的規定:美國食品藥品監督管理局(FDA)發布的指導原則中指出生物制品宿主細胞DNA殘余限度不得超過100pg/劑量,對于大劑量的如單克隆抗體的生物制品,根據其殘余DNA來源及給藥途徑,DNA殘留量可放寬至10ng/劑量...
如今,實時熒光定量PCR(qPCR)是一種優先的支原體檢測方法,因為它準確、靈敏且省時。與常規PCR不同,qPCR允許實時觀察支原體DNA的DNA擴增,因為特異性引物在熒光探針存在的情況下與其靶序列結合,從而導致DNA擴增和熒光增強。此外,qPCR比常...
磁珠法核酸提取過程中的常見誤區--洗滌次數越多,洗滌效果越好提取得到的核酸雜質過多時,使用者會考慮多進行幾次洗滌,以得到更為純凈的核酸。增加洗滌次數確實有利于提純核酸,但考慮到每次洗滌都會損失一定量的核酸,且增加了核酸斷裂水解的可能性,所以一般來說洗滌次數控制...
宿主細胞殘留DNA檢測:《美國藥典》和《歐洲藥典》將高靈敏度、高特異性的qPCR法和非序列特異性的DNA結合蛋白法作為宿主細胞殘留DNA檢測的推薦方法;《中國藥典》則收錄了特異性高的定量熒光探針qPCR法和半定量的DNA探針雜交法以及非序列特異性的熒光染色法。...
南京正揚生科科技有限公司自主研發的支原體檢測試劑盒的優點有哪些?①操作簡單:樣品操作十分簡便,無需自配試劑,且樣品無需離心富集,節省大量時間;②樣品需求量少:只需500uL樣品進行前處理即可,無需進行樣品離心富集。③檢測用時較短:蕞快2h即可出結果,是CGT領...
傳統核酸提取方法和磁珠法核酸提取的優缺點比較:傳統核酸提取法磁珠法技術簡單高質量、高通量手工提取自動化流程操作繁瑣、費時費力免去了復雜的人工提取不適合大量樣品核酸提取減少酚類、氯仿等有機試劑對操作人員傷害不適合臨床分子診斷極大滿足如今對核酸提取效率的需求 ...
磁珠法核酸提取常見問題之磁珠結塊:導致磁珠結塊的可能原因:①磁珠吸附了過多雜質,包括蛋白、脂質、多糖等;②磁珠粒徑太小;③洗滌完畢,乙醇干燥時間過長。④磁珠磁吸附時間過長;⑤操作中途含磁珠的樣品管離心速率過高、離心時間過長;磁珠結塊的解決辦法:①優化裂解液、結...
各國藥典對于宿主細胞殘留DNA檢測方法的推薦:理想的定量檢測方法其靈敏度應能檢測到約10pg/劑量的殘留DNA。雜交法、基于DNA結合蛋白的免疫色譜法(閾值法)和定量PCR方法因靈敏度均可達到檢測要求,都屬于經典方法。①《美國藥典》將高靈敏度、高特異性的qPC...
宿主細胞DNA殘留問題備受關注。研究表明,生物制品中來源于宿主細胞的外源性DNA具有傳遞**或病毒相關基因的可能性。各國藥品監督管理機構對生物制品中宿主細胞殘留DNA有明確的檢測要求和標準。南京正揚生物科技有限公司自主研發生產的宿主細胞殘留核酸提取純化試...
基于細胞培養法和qPCR快檢法都能實現對重組腺相關病毒載體(rAAV)中復制型腺相關病毒(rcAAV)的污染率的檢測,但兩者在實際檢測中都存在檢測值不夠準確的風險(基于細胞培養法存在低于實際值的風險qPCR快檢法存在高于實際值的風險)。南京正揚生物科技有限公司...
南京正揚生物科技有限公司自主研發生產的全自動核酸提取儀是針對生物制品核酸提取的技術平臺,內置專業優化的前處理程序,配套本公司的自動化前處理試劑盒和配套耗材,只需一鍵操作即可完成各類生物材料和制品中的宿主細胞、微生物、病毒因子等各類微量DNA/RNA的提取純化。...
慢病毒載體是以人類免疫缺陷Ⅰ型病毒(humanimmunodeficiencyvirus,HIV-1)為基礎發展起來的基因醫治載體,屬于逆轉錄病毒家族,又區別于一般的逆轉錄病毒載體,比逆轉錄病毒載體具有更強的***能力,具有容納外源性目的基因片段大、穩定整...
宿主細胞殘留DNA檢測過程中,qPCR反應體系配制環節有哪些注意事項?①qPCR的整個操作要低溫環境進行,防止模板的降解,試劑避免反復凍融。②配制反應體系前試劑要充分混勻,除了模板外的反應體系要統一配制,然后再分配至qPCR管中,配制的時候考慮到操作或耗材帶來...
南京正揚生物科技有限公司自主研發生產的全自動核酸提取儀的優點:①操作簡單:只需2步手工操作;②快速提取:只需26min即可完成樣品微量核酸的提取純化;③精確控溫:提高裂解和洗脫效率,避免系統誤差;④穩定可靠:避免人工操作引起的差異及錯誤,結果穩定,重復性好;⑤...
南京正揚生科科技有限公司自主研發的CHO宿主細胞殘留DNA檢測試劑盒的優點有哪些?①重復性好,同一樣品重復檢測20次,CV<15%;②提取回收率好,尤其對于低濃度樣品;③操作簡便,無需自行配制試劑;④檢測時間短,從樣品提取純化到出結果只需2.5h;⑤適應性...
宿主細胞殘留DNA檢測:用qPCR法進行宿主細胞殘留DNA檢測時,出現擴增曲線異常的可能原因是什么?①如出現非特異性擴增現象:反應管未蓋緊或密閉性差引起溶液蒸發而造成。上機前確保管蓋密閉,反應結束后查看八聯管或96孔板各管液面是否一致。與設備硬件相關,需咨詢硬...
如何評估磁珠法核酸提取產品的提取效果,可以從以下角度進行相關產品的性能評估:Purity(純度),具體而言就是磁珠提取后的核酸中含有多少非核酸類的雜質殘留,如蛋白、鹽、多糖等。該指標通常用吸光度比值(A260/A280和A260/A230)來衡量。Qualit...
常用的支原體檢測方法有傳統的分離培養法、指示細胞培養法(DNA染色法)、ELISA法、PCR法等。分離培養法基本不會出現假陰性結果,因此被譽為支原體檢測金標準。不過也存在四個弊端,一是檢測時間太長,支原體要長出明顯克隆至少需要4周時間;二是盡管可以檢測絕大多數...
宿主細胞殘留DNA檢測的方法介紹:①熒光探針qPCR法:可進行定量分析,被USP/EP/ChP收錄,檢出限可低至1pg/Sample,蕞小檢測片段可至50bp,該檢測方法具備靈敏度高、特異性高、通量高的特點,但是成本相對其他方法略高。②熒光染色法:該方法可進行...
生物檢測通常用于篩選載體產品中的RCR,而對輸注后患者的監測則依賴于分子或血清學檢測。分子和血清學檢測比生物檢測更快,消耗的資源更少;然而,它們也很容易給出誤報。蕞常用的RCR病毒檢測是擴展的S+/L-測定和標記拯救測定。蕞常見的RCL生物測定方法是通過在增殖...
各國藥典對于宿主細胞殘留DNA檢測方法的推薦:理想的定量檢測方法其靈敏度應能檢測到約10pg/劑量的殘留DNA。雜交法、基于DNA結合蛋白的免疫色譜法(閾值法)和定量PCR方法因靈敏度均可達到檢測要求,都屬于經典方法。①《美國藥典》將高靈敏度、高特異性的qPC...
南京正揚生物科技有限公司自主研發生產的全自動核酸提取儀是針對生物制品核酸提取的技術平臺,內置專業優化的前處理程序,配套本公司的自動化前處理試劑盒和配套耗材,只需一鍵操作即可完成各類生物材料和制品中的宿主細胞、微生物、病毒因子等各類微量DNA/RNA的提取純化。...
E.coli宿主細胞殘留DNA檢測在mRNA藥物生產中的應用。mRNA藥物的制備流程包括模板DNA制備、mRNA原液制備和成品制備,其中DNA原液的制備過程中,需借助大腸桿菌作為宿主細胞擴增質粒DNA,線性化的質粒DNA作為體外轉錄(IVT)的模板,因此,模板...
如何選擇正確的方法進行細胞的支原體檢測?支原體的檢測方法有哪些?目前實驗室常用的支原體檢測方法有培養法、熒光指示細胞法、PCR法、掃描電子顯微鏡法,這些方法各有優缺點。各實驗室可根據具體情況,選擇不同的方法,或幾種方法聯合使用。PCR作為一種快速、靈敏、特異且...
磁珠法核酸提取的基本原理:核酸結合到磁珠上主要依靠靜電作用、疏水作用和氫鍵作用。細胞或組織在裂解液作用下,其中的DNA/RNA被釋放出來。此時經過表面修飾的超順磁性氧化硅納米磁珠即與核酸進行“特異性結合”,形成“核酸-磁珠復合物”。然后在外加磁場的作用下,復合...
南京正揚生物科技有限公司自主研發生產的復制型腺相關病毒檢測試劑盒簡介:rcAAV檢測試劑盒(PCR熒光探針法)是一款既適用于基于細胞培養法對rcAAV的檢測,也適用于對rcAAV的直接檢測的試劑盒,可達到兩種方法間相互驗證、相互補充的目的。試劑盒中Refere...
磁珠法核酸提取過程中的常見誤區--和某種試劑盒比對效果不好就是磁珠不好很多客戶在篩選磁珠過程中都是在已經成熟試劑體系下,簡單地等量替換磁珠,用于比較磁珠效果。這樣就會很容易得出某種磁珠效果不好的結論,但實際上,由于不同磁珠適合的體系和用量是不同的,往往需要調整...
CHO宿主細胞殘留DNA檢測常見問題:①檢測靈敏度:qPCR法可以達到非常低的檢測靈敏度,通常可以檢測到1個CHO細胞殘留DNA分子。這種高靈敏度可以有效地避免生物制品中CHO細胞殘留DNA對患者的潛在風險。②特異性:qPCR法的特異性非常高,可以準確區分CH...
宿主細胞殘留DNA檢測與重組人源化膠原蛋白行業:①外源性DNA:作為醫療器械使用的原材料,宜根據預期臨床用途(作為植入物體內使用,還是作為敷料等體表、黏膜使用)、使用量等,確定外源性DNA殘留量限值。如含重組人源化膠原蛋白的產品預期為體內植人劑,推薦參考生物制...
盡管逆轉錄病毒和慢病毒載體被設計為具有復制缺陷,但仍有可能在生產過程中或輸注到患者體內后發生重組,從而產生新的具有復制能力的逆轉錄病毒/慢病毒(RCR/RCL)。FDA在有關細胞產品和患者中檢測RCR復制型逆轉錄病毒/RCL復制型慢病毒的指南中建議使用適當的生...