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在進行原代肝細胞培養時，選擇合適的培養條件非常重要，以下是一些選擇培養條件的建議：1.培養基：選擇適合肝細胞生長的培養基，如William'sE培養基、RPMI1640培養基等。不同的培養基成分可能會影響肝細胞的生長和功能。2.溫度和濕度：肝細胞的培養溫度通常為37°C，濕度為95%左右。在培養過程中，需要保持培養箱內的溫度和濕度穩定。3.氧氣含量：肝細胞需要充足的氧氣供應，因此需要選擇透氣性好的培養容器，并保持培養箱內的氧氣含量充足。4.細胞密度：肝細胞的培養密度需要根據實驗目的和培養條件來確定。一般來說，肝細胞的培養密度不宜過高，以免影響細胞的生長和功能。5.細胞因子：在培養過程中，...

原代肝細胞比較常用的模型是二維模型。在膠原包被的培養板上，原代肝細胞可貼壁培養，同樣高密度培養有助于肝細胞分化狀態的維持。但原代肝細胞在體外的培養時間較短，人原代肝細胞在體外培養3天內可保持乙肝病毒易感性，培養兩周發生明顯的去分化以及細胞凋亡情況。北京大學鄧宏魁教授發表在《科學》上的數據顯示，通過添加5種小分子化合物抑制原代肝細胞去分化進程，可在體外長期維持肝細胞的分化狀態，維持時間長達八周。那為什么原代肝細胞在體外容易去分化呢？肝細胞在體外缺乏了肝細胞與肝非實質細胞的交流，又或者缺乏了肝臟的三維結構。基于以上問題與分析，我在碩士期間開展了肝細胞與肝非實質細胞的共培養工作。結果顯示...

在新藥研發的過程中，原代肝細胞是不可或缺的體外模型，這是因為肝臟能夠代謝大部分藥物。因此，通過使用原代肝細胞，可以更加準確地模擬藥物在人體內的代謝和毒理反應，為新藥研發提供更加可靠的數據支持。 在藥物代謝實驗中，原代肝細胞可以幫助研究人員了解藥物在體內的代謝途徑、代謝產物以及代謝速率等信息。這些信息對于藥物的研發和臨床應用都具有重要意義。同時，在藥物毒理實驗中，原代肝細胞也能夠幫助研究人員評估藥物的毒性和安全性，為藥物的臨床應用提供保障。 除此之外，原代肝細胞還可以用于藥物靶向誘導實驗。通過對原代肝細胞進行特定的處理，可以使其表達特定的蛋白質或基因，從而實現對藥物靶向的調控。這種方法可以幫助研...

原代肝細胞還廣泛應用于構建移植人肝組織的小鼠模型。為了研究肝臟疾病的發病機制和開發新的解決方法，科學家們開發了小鼠模型來模擬人類肝臟疾病。其中，將人原代肝細胞移植于鼠可建立移植人肝組織的高度免疫缺陷的小鼠模型。這種模型可以用于研究肝炎、livercancer、肝纖維化等肝臟疾病的發病機制和治療方法。常用的小鼠模型為HBV三聚體小鼠模型。該模型首先對BALB/c鼠進行全身致命性照射以去除正常小鼠的免疫系統，然后用SCID小鼠骨髓細胞進行免疫重構，然后將已經受HBV影響的人原代肝細胞移植到鼠肝內。大約80％的鼠出現病毒血癥，這意味著該模型可以用于研究HBV的發病機制和克服方法。盡管血漿中病毒滴度比...

在進行原代肝細胞培養時，是否需要添加血清？在進行原代肝細胞培養時，通常需要添加血清。血清是一種含有多種營養物質和生長因子的液體，可以提供細胞生長所需的營養和生長因子，促進細胞的生長和增殖。血清中含有多種蛋白質、氨基酸、維生素、礦物質等營養物質，可以為細胞提供能量和營養，促進細胞的生長和增殖。此外，血清中還含有多種生長因子，如胰島素、表皮生長因子等，可以促進肝細胞的分化和增殖。然而，血清中也含有一些雜質和微生物，可能會對細胞的生長和功能產生不利影響。因此，在使用血清時，需要選擇高質量的血清，并對血清進行嚴格的質量控制和檢測，以確保血清的質量和安全性。此外，在進行原代肝細胞培養時，也可以使用...

原代肝細胞的體外擴增不是一件容易的事。原代肝細胞是一種非常重要的細胞類型，具有豐富的酶系和多種特異性功能，因此被大量用于生物化學、實驗性肝損傷、藥代動力學、毒理學和cancer等研究。然而，這些細胞在體外的存活能力非常有限，所以分離并培養出高活性的原代肝細胞并不是一件容易的事情。 分離高質量的原代肝細胞，需要采用一系列復雜的技術和方法。首先，需要選擇合適的動物模型，以獲得足夠數量的肝組織。然后，需要對肝組織進行消化和分離，通常使用的方法包括機械分離、膠原酶消化、胰蛋白酶消化等。在分離過程中，需要注意避免對細胞的損傷，以保證細胞的活力和功能完整性。 分離出的原代肝細胞也需要按照嚴格的標準進行培育...

原代肝細胞是一種來源于肝臟組織的細胞，具有很高的酶水平和重現性，是進行肝臟相關研究的重要材料。我們公司的原代肝細胞產品采用較新的培養技術，能夠保持細胞的原始性，具有很高的可再生性和穩定性，可以廣泛應用于肝臟疾病的研究和藥物篩選。我們的原代肝細胞產品采用關鍵技術的培養方法，能夠保證細胞的生長和分化，同時不會影響細胞的穩定性和功能。我們的產品具有以下特點：1.高質量：我們的原代肝細胞產品來源于健康的人體肝臟組織，具有很高的生物學活性和穩定性，可以保證研究結果的準確性和可靠性。2.易于培養：我們的原代肝細胞產品采用較新的培養技術，能夠保持細胞的原始性，同時不需要復雜的培養條件，可以方便地進行培養和擴...

在原代肝細胞培養過程中，如何避免污染？在原代肝細胞培養過程中，避免污染是非常重要的，以下是一些避免細胞污染的方法：1.嚴格遵守無菌操作：在進行原代肝細胞培養前，需要對所有設備和材料進行嚴格的無菌處理，并在操作過程中嚴格遵守無菌操作規范，避免細菌和其他微生物的污染。2.使用無菌技術：在進行原代肝細胞培養時，需要使用無菌技術，例如使用無菌培養皿、無菌吸管、無菌手套等，以避免污染。3.保持培養環境清潔：培養環境的清潔度對原代肝細胞的培養非常重要。需要定期清潔培養室和培養設備，并保持室內通風良好。4.控制人員流動：在培養過程中，需要控制人員流動，盡量減少人員進出培養室，以避免污染。5.使用...

保存溫度是影響原代肝細胞存活和功能的關鍵因素之一。一般來說，原代肝細胞的保存溫度為4℃，但是在這種溫度下，細胞的代謝活動仍然會繼續進行，導致細胞的壽命有限。因此，為了延長原代肝細胞的壽命，可以將其保存在低溫下，如-80℃或液氮中。這種保存方式可以有效地減緩細胞的代謝活動，延長細胞的壽命，但是在保存過程中需要注意加入凍存液，防止細胞凍結損傷。 原代肝細胞的運輸也是一個重要的問題。在運輸過程中，細胞可能會受到振動、溫度變化、氧氣和營養物質的缺乏等不利因素的影響，導致細胞失活或功能受損。為了保證細胞的完整性和功能性，可以采用液氮運輸的方式，即在低溫下運輸細胞。在運輸前給細胞提供充足的營養和氧氣，也可...

原代肝細胞的分離方法有很多種，以下是其中四種常見的方法：1.膠原酶消化法：膠原酶是一種使用廣的細胞分離酶，可以消化肝細胞外基質中的膠原蛋白，從而使肝細胞分離出來。該方法通常使用膠原酶消化肝臟組織，然后通過離心和過濾等步驟分離肝細胞。2.機械分離法：機械分離法是一種通過物理方法分離肝細胞的方法。該方法通常使用攪拌器、濾網或離心等設備將肝臟組織中的肝細胞分離出來。3.酶消化結合機械分離法：這種方法是將膠原酶消化和機械分離相結合的方法。該方法通常先使用膠原酶消化肝臟組織，然后通過機械分離的方法將肝細胞分離出來。4.密度梯度離心法：密度梯度離心法是一種通過離心的方法分離肝細胞的方法。該方法...

在進行原代肝細胞培養時，選擇合適的培養條件非常重要，以下是一些選擇培養條件的建議：1.培養基：選擇適合肝細胞生長的培養基，如William'sE培養基、RPMI1640培養基等。不同的培養基成分可能會影響肝細胞的生長和功能。2.溫度和濕度：肝細胞的培養溫度通常為37°C，濕度為95%左右。在培養過程中，需要保持培養箱內的溫度和濕度穩定。3.氧氣含量：肝細胞需要充足的氧氣供應，因此需要選擇透氣性好的培養容器，并保持培養箱內的氧氣含量充足。4.細胞密度：肝細胞的培養密度需要根據實驗目的和培養條件來確定。一般來說，肝細胞的培養密度不宜過高，以免影響細胞的生長和功能。5.細胞因子：在培養過程中，...

肝細胞是人體內重要的細胞之一，扮演著重要的代謝作用。然而，由于肝細胞的特殊性質，使得它們在體外的培養和研究變得非常困難。為了解決這個問題，科學家們開發了許多不同的肝細胞培養方法，其中包括貼壁培養和懸浮培養。 隨著3D培養技術的出現，原代肝細胞的應用范圍也進一步得到了擴展。3D培養是一種將細胞培養在三維空間中的方法，可以更好地模擬體內的情況。在3D培養中，肝細胞可以形成復雜的結構，從而更好地模擬體內的情況。此外，3D培養還可以使原代肝細胞更好地保持其原有的形態和功能，從而更好地研究肝細胞的生理和病理過程。 原代肝細胞的培養和研究對于了解肝臟的生理和病理過程至關重要。不同的原代肝細胞培養方法各有優...

貓作也是原代肝細胞的常用供體，近年來在生物醫藥領域的研究中扮演著越來越重要的角色。相對于小鼠和大鼠等試驗用動物，貓的體型更大，便于試驗操作和觀察，因此被廣泛應用于科研、教育和藥物研發等領域。據美國農業部動植物衛生檢疫局（APHIS）的統計數據顯示，在2017年，美國就使用了約萬只貓進行試驗研究。而在中國，試驗用貓的年使用量也在不斷增加，據文獻報道，每年浙江省的藥品質量監測就需要使用400-500只試驗用貓。貓的原代肝細胞和肝微粒體是不可或缺的研究材料。通過對貓的肝細胞進行體外研究，可以更加準確地評估藥物的代謝和毒性，為藥物研發提供重要的參考依據。此外，貓的原代肝細胞還可以用于疾病模型的建立和藥...

原代肝細胞由于其敏感性和易受外界環境影響，細胞活率較低，成為制約其應用的瓶頸之一。 適當的方法可以提高原代肝細胞培養活率。首先，選擇合適的動物或人體來源是提高原代肝細胞細胞活率的關鍵。一般來說，年齡較小、健康狀態良好的動物或人體組織中的原代肝細胞活性較高，因此應盡可能選擇這些來源。 其次，分離和培養過程中的細胞處理方法也會影響原代肝細胞的細胞活率。在分離過程中，應盡可能減少機械或化學損傷，避免對細胞造成不可逆的傷害。在培養過程中，應注意細胞的營養和生長環境，包括培養基的配方、溫度、濕度、氧氣濃度等因素，以保證細胞的正常生長和代謝。 此外，添加適當的生長因子和細胞因子也可以提高原代肝細胞的細胞活...

原代肝細胞是簡單有效的生物體外模型。相比于其他類型誘導產生的肝臟細胞或是cancer細胞系，原代肝細胞在造模的同時不需要復雜的對細胞進行重編程，以及誘導分化，可以更方便更快速的進行高通量藥理研究。此外和另外兩種方式相比，原代肝細胞能夠更準確的反應體內的真實情況，有數據表明，原代肝細胞比iPSC誘導產生的肝細胞內的堿基取代少數倍，同時這些細胞還保留了捐獻者的特有特征，是較為理想的研究模型。另一個優勢在于，原代肝細胞衍生的Organoid可以提供獨特的肝毒模型，因為原代細胞保留了患者特有的I期II期藥物代謝情況。原代細胞不僅擁有捐贈者特有的生理特性，同時也具備其他兩種肝細胞在應對病原體時的生理反應...

在原代肝細胞培養過程中，如何避免污染？在原代肝細胞培養過程中，避免污染是非常重要的，以下是一些避免細胞污染的方法：1.嚴格遵守無菌操作：在進行原代肝細胞培養前，需要對所有設備和材料進行嚴格的無菌處理，并在操作過程中嚴格遵守無菌操作規范，避免細菌和其他微生物的污染。2.使用無菌技術：在進行原代肝細胞培養時，需要使用無菌技術，例如使用無菌培養皿、無菌吸管、無菌手套等，以避免污染。3.保持培養環境清潔：培養環境的清潔度對原代肝細胞的培養非常重要。需要定期清潔培養室和培養設備，并保持室內通風良好。4.控制人員流動：在培養過程中，需要控制人員流動，盡量減少人員進出培養室，以避免污染。5.使用...

原代肝細胞培養中去除endotoxin是十分重要的。原代肝細胞培養是一種常用的實驗方法，但在培養過程中，細胞可能會受到endotoxin的污染，這會影響實驗結果的準確性。 endotoxin是一種由細菌產生的有毒物質，可以引起炎癥反應和細胞損傷。在原代肝細胞培養中，endotoxin可能來自于培養基、細胞培養器具或細胞本身。因此，需要采取一些措施來去除endotoxin。 一種常用的方法是使用endotoxin去除劑，例如聚陽離子樹脂（Polyclonal Cationic Resin，PCR）或聚乙烯醇（Polyvinyl Alcohol，PVA）。這些去除劑可以吸附endotoxin，從而...

貼壁培養是一種常用的細胞培養方法，可以使原代肝細胞在培養皿表面附著生長，形成單層細胞群落。原代肝細胞的貼壁培養需要注意以下幾點： 1. 分離和準備細胞：從新鮮的動物肝臟中分離出原代肝細胞后，需要進行細胞計數和質量檢測，確保細胞數量和質量符合要求。 2. 培養基的選擇：原代肝細胞的培養基需要選擇適合其生長和代謝的培養基，常用的培養基包括DMEM、RPMI-1640等。 3. 培養皿的涂層：為了使原代肝細胞能夠附著生長，需要在培養皿表面涂層一定濃度的膠原蛋白、明膠或者其他細胞黏附因子。 4. 細胞接種和培養：將準備好的原代肝細胞接種到涂層好的培養皿中，加入適量的培養基，放入恒溫培養箱中進行培養。需...

原代肝細胞也可以用于Organ-on-a-chip的構建。Organ-on-a-chip是一項創新性的科技成果，它在載玻片大小的芯片上構建了一個完整的生理組織微系統，其中包含有原代肝細胞、肝非實質細胞、生物流體和機械力所需微環境的關鍵要素。這個微型肝臟模型可以在體外模擬人體肝臟的主要結構功能特征和復雜的組織間聯系，為藥物藥效評價、藥物安全性評價、化妝品安全性評價、食品安全性評價、環境保護評價等提供了一種全新的方法和手段。 這個微型肝臟模型的研發，是在對傳統的肝臟模型進行改進和創新的基礎上實現的。傳統的肝臟模型通常是基于動物實驗或體外細胞培養的方法，但這些方法存在著很多的局限性和缺陷。例如，動物...

肝臟是人體內重要的organ之一，它不僅是人體的化學工廠，還是藥物代謝的重要organ。藥物在體內的代謝過程中，肝臟扮演著至關重要的角色。因此，研究肝臟的代謝功能對于藥物研發和毒理學研究具有重要的意義。 在體外藥物代謝研究中，肝臟是常用的模型之一。常用的體外模型包括肝微粒體、肝S9、肝胞質液、原代肝細胞、肝組織切片和重組人代謝酶等。其中，原代肝細胞因具有較好的體外試驗重現性，基本維持了肝臟的代謝功能，特別是較好的保留了與體內一致的酶水平，成為了體外藥物試驗的“金標準”，廣泛應用于藥物代謝與毒理學研究中。 原代肝細胞的研究對于藥物代謝和毒理學研究具有重要的意義。它可以模擬體內肝臟的代謝過程，研究...

原代肝細胞有三種常用的分離方法，每種方法都有對應的原理。原代肝細胞是從動物體內分離出來的未經過傳代的肝細胞，具有很高的生物學活性和生理功能，是研究肝臟生理和病理的重要材料。目前，分離原代肝細胞的方法有直接剪切法、組織塊消化法和兩步膠原酶灌流法等。其中，兩步膠原酶灌流法是一種比較常用的方法，因為它對肝細胞的損傷作用較小，可以提高肝細胞的產量和活力。 在兩步膠原酶灌流法中，首先需要使用螯合劑來螯合肝臟中的鐵離子，以避免膠原酶的活性受到抑制。然后，將肝臟灌注膠原酶，使其分解膠原纖維，從而釋放出肝細胞。這種方法可以分離出數量多且活力好的肝細胞，適用于各種動物的肝臟，包括小鼠、大鼠、豬等。 直接剪切法是...

原代肝細胞的體外培養一直是困擾學者們開展肝病研究的難題。為了研究肝臟的生理和病理過程，學者們一直在努力開發體外培養原代肝細胞的方法。 一般來說，原代肝細胞體外培養可以維持7-14天左右，7天以后細胞的狀態和活率會逐漸開始下降。 為了克服這些局限性，科學家們開始嘗試將肝實質細胞和肝非實質細胞共同培養。根據鄧宏魁教授的5C文章，將肝實質細胞和肝非實質細胞共同培養時，肝實質細胞和肝非實質細胞可以相互作用，形成更加復雜的細胞群體，從而更好地模擬肝臟的生理和病理過程，通過這種方法可以將原代肝細胞體外培養128天。 當然，共同培養方法也存在一些局限性，比如如何控制細胞的生長和分化、如何保持細胞的穩定性等。...

肝細胞是人體內重要的細胞之一，扮演著重要的代謝作用。然而，由于肝細胞的特殊性質，使得它們在體外的培養和研究變得非常困難。為了解決這個問題，科學家們開發了許多不同的肝細胞培養方法，其中包括貼壁培養和懸浮培養。 隨著3D培養技術的出現，原代肝細胞的應用范圍也進一步得到了擴展。3D培養是一種將細胞培養在三維空間中的方法，可以更好地模擬體內的情況。在3D培養中，肝細胞可以形成復雜的結構，從而更好地模擬體內的情況。此外，3D培養還可以使原代肝細胞更好地保持其原有的形態和功能，從而更好地研究肝細胞的生理和病理過程。 原代肝細胞的培養和研究對于了解肝臟的生理和病理過程至關重要。不同的原代肝細胞培養方法各有優...

原代肝細胞是簡單有效的生物體外模型。相比于其他類型誘導產生的肝臟細胞或是cancer細胞系，原代肝細胞在造模的同時不需要復雜的對細胞進行重編程，以及誘導分化，可以更方便更快速的進行高通量藥理研究。此外和另外兩種方式相比，原代肝細胞能夠更準確的反應體內的真實情況，有數據表明，原代肝細胞比iPSC誘導產生的肝細胞內的堿基取代少數倍，同時這些細胞還保留了捐獻者的特有特征，是較為理想的研究模型。另一個優勢在于，原代肝細胞衍生的Organoid可以提供獨特的肝毒模型，因為原代細胞保留了患者特有的I期II期藥物代謝情況。原代細胞不僅擁有捐贈者特有的生理特性，同時也具備其他兩種肝細胞在應對病原體時的生理反應...

原代肝細胞的研究一直是科學家們關注的焦點之一。原代肝細胞作為肝臟的主要細胞類型，對于肝臟生物學和醫學研究具有重要的意義。 原代肝細胞的研究需要多學科的合作，包括生物學、醫學和化學等。生物學家們需要對肝臟的解剖結構、生理功能和細胞分化等方面進行深入研究，以便更好地理解原代肝細胞的生物學特性。醫學家們則需要將原代肝細胞的研究與臨床實踐相結合，探索其在肝臟疾病診斷中的應用價值。而化學家們則需要開發出更加高效的原代肝細胞培養和分離技術，以便更好地保證實驗結果的準確性和可靠性。 原代肝細胞的研究還需要不斷地更新和改進技術和方法。隨著科技的不斷進步，越來越多的高通量技術和基因編輯技術被應用到原代肝細胞的研...

原代肝細胞的分離凍存技術是一項非常復雜的實驗技術，需要特定的實驗室條件和高超的技術。在實驗室中，必須嚴格遵守實驗室管理和質量控制的要求，確保實驗的準確性和可靠性。同時，由于涉及到人體組織的使用，還需要遵守倫理和法律規定，確保實驗的合法性和道德性。在實驗室中，分離原代肝細胞需要使用一系列的試劑和設備，如胰蛋白酶、膽汁酸、離心機等。這些試劑和設備必須經過嚴格的質量控制，確保其純度和有效性。同時，實驗室的環境條件也必須符合要求，如溫度、濕度、潔凈度等，以保證實驗的穩定性和可重復性。在分離原代肝細胞的過程中，還需要進行細胞培養和細胞鑒定等步驟。這些步驟需要高超的技術和經驗，以確保細胞正常的生長和增殖。...

原代肝細胞研究歷史可以追溯到20世紀初。當時，科學家們開始對肝臟的結構和功能進行深入研究，并嘗試從肝臟中分離出原代肝細胞進行研究。早期的研究方法是通過肝臟切片的方式來分離出肝細胞，但是這種方法存在很多局限性，比如細胞的存活率很低，細胞的數量也很有限。 隨著技術的不斷進步，科學家們開始嘗試使用酶解法來分離原代肝細胞。這種方法可以有效地提高細胞的存活率和數量，但是由于酶的質量和濃度的不同，細胞的質量和純度也存在很大的差異。 在20世紀50年代，科學家們開始使用離心法來分離原代肝細胞。這種方法可以有效地提高細胞的純度和數量，但是由于離心過程中細胞受到的力的不同，細胞的形態和功能也會發生改變。 隨著細...

原代肝細胞的分類是非常多樣化的，每種類型的細胞都具有不同的形態和功能，它們共同構成了肝臟。接下來我們就來看看肝臟的構成。首先是肝細胞，也稱為肝細胞主細胞，它們占據了肝臟細胞總數的80%以上。肝細胞是肝臟重要的細胞類型，它們具有多種重要的生理功能，如合成和分泌膽汁、代謝和儲存營養物質等。 其次是肝星狀細胞，也稱為伊氏細胞。肝星狀細胞是肝臟中的一種非常重要的細胞類型，它們具有多種功能，如調節肝臟免疫反應、維持肝臟微環境穩定等。 還有肝內膽管上皮細胞，它們是肝內膽管的主要細胞類型，具有分泌和排泄膽汁的功能。此外，還有肝內血管內皮細胞、肝內間質細胞等。 總之，原代肝細胞的分類是非常多樣化的，每種類型的...

原代肝細胞有三種常用的分離方法，每種方法都有對應的原理。原代肝細胞是從動物體內分離出來的未經過傳代的肝細胞，具有很高的生物學活性和生理功能，是研究肝臟生理和病理的重要材料。目前，分離原代肝細胞的方法有直接剪切法、組織塊消化法和兩步膠原酶灌流法等。其中，兩步膠原酶灌流法是一種比較常用的方法，因為它對肝細胞的損傷作用較小，可以提高肝細胞的產量和活力。 在兩步膠原酶灌流法中，首先需要使用螯合劑來螯合肝臟中的鐵離子，以避免膠原酶的活性受到抑制。然后，將肝臟灌注膠原酶，使其分解膠原纖維，從而釋放出肝細胞。這種方法可以分離出數量多且活力好的肝細胞，適用于各種動物的肝臟，包括小鼠、大鼠、豬等。 直接剪切法是...

貼壁培養的原代肝細胞是酶誘導研究的重要模型，也是藥物代謝實驗的重要模型。這種模型可以通過倍數變化方法來評估藥物是否為酶的誘導劑。具體來說，研究人員可以使用已知的陽性和陰性對照藥物來校準體外系統，然后將研究藥物與細胞共孵育，測定孵育后CYP酶的mRNA表達水平倍數變化，以評估藥物是否為酶的誘導劑。這種方法可以幫助研究人員更好地了解藥物相互作用的機制，從而更好地指導臨床用藥。酶誘導是一種藥物相互作用的現象，指某些化合物能夠提高肝臟藥物代謝酶的活性，從而導致合用的藥物代謝速率加快，使得原藥的血藥濃度下降，進而使其療效降低或喪失。這種現象在臨床上非常常見，因為許多藥物都需要通過肝臟代謝酶來進行代謝，而...