5.滴加抗體,4℃過液或室溫5′~1hour。6.,洗三次,每次5分鐘。7.滴加第二抗體,室溫15′~60′。8.洗凈,洗三次,每次5分鐘。9.滴加ABC復合物,室溫15~60分鐘。10.洗三次,每次5分鐘。11.Tris–HCL5~10分鐘,此步可省略。12.DAB—H2O2顯色:用,室溫5~30分鐘,隨時鏡檢(DAB用時新配)13.自來水洗凈。14.用Mayer蘇木素或甲基綠,復染胞核(可不染)。15.常規脫水、透明、封固、鏡檢。結果:棕褐色反應產物**抗原X的定位。免疫組化染色基本技術及注意事項1.實驗計劃①根據課題的內容選用動物,選用配套的Ab。如Ab—I鼠抗人的抗體,與其他種屬間無交叉,則不能用其他動物,而且Ab-Ⅱ必須是羊抗鼠,若***法Ab-Ⅲ必須來源于鼠,否則不能連接成復合物。②若要比較染色深淺在對照組與實驗組間的差異,在貼片方面較好貼于同一張載片上,否則無可比性。③選用的試劑可靠,貨源充足,隨時可取。2.Ab稀釋度(如系購買的藥盒有工作液和原液)(1)工作液:無須稀釋(2)原液:①應參照其提供的工作液濃度進行預試驗驗。如:工作液濃度為1∶1000,可選1∶500,1∶1000,1∶1500試驗;若:1∶500有背景,1∶1000陽性反應稍淺,可選1∶750進行試驗。②原液的保存。上海免疫組化,免疫熒光性價比找融享生物高效率周期快。山西動物實驗免疫組化技術
免疫組化。染色 免疫組化可以輔助病理診斷、指導診斷、評估預后,所以在做免疫組化過程中的質控問題處理尤其重要[1]。隨著免疫組化試劑新種類不斷出現及方法的改進,特別是即用型試劑盒的出現,使抗體的標記更加簡便、快捷,更加規范化。免疫組化標準化染色技術是一項實驗性很強的技術,任何一個環節出現......免疫組化可以輔助病理診斷、指導診斷、評估預后,所以在做免疫組化過程中的質控問題處理尤其重要,隨著免疫組化試劑新種類不斷出現及方法的改進,特別是即用型試劑盒的出現,使抗體的標記更加簡便、快捷,更加規范化。免疫組化標準化染色技術是一項實驗性很強的技術,任何一個環節出現問題,都可以直接影響免疫組化結果。吉林免疫學免疫組化檢測電話快速高效的制備NGS測序?轉錄組測序。
所以它是可以減少背景染色。滴加試劑時要均勻、足夠,要比切片上的組織界限寬出0.05~0.35 cm防止出現邊緣效應。即使是同一種抗體,由于產品批號不同,其效價可能有差異,因此,新購進的抗體一定要進行預實驗,找出比較好條件并進行記錄。此外,組織浸液的溫度,切片烘烤的溫度控制,實驗操作過程中的室內溫度及抗體的效價等都是影響免疫組化標記質量的重要因素。因此,耐心細致的工作態度,標準化、規范化的操作,是完成實驗的基本保證。
被檢測的物質
組織或細胞中凡是能作為抗原或半抗原,如蛋白質、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、核酸及病原體等都可用相應的特異性抗體進行檢測。
6、特點
1)特異性強
免疫學的基本原理決定抗原與抗體之間的結合具有高度特異性,因此,免疫組化從理論上講也是組織細胞中抗原的特定顯示,如角蛋白(keratin)顯示上皮成分,LCA顯示淋巴細胞成分。只有當組織細胞中存在交叉抗原時,才會出現交叉反應。
2)敏感性高
在應用免疫組化的起始階段,由于技術上的限制,只有直接法、間接法等敏感性不高的技術,那時的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍;現在由于ABC法或SP三步法的出現,使抗體稀釋上千倍、上萬倍甚至上億倍仍可在組織細胞中與抗原結合,這樣高敏感性的抗體抗原反應,使免疫組化方法越來越方便地應用于常規病理診斷工作。
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實驗為例
從我接觸的很多本科生和研究生中發現,他們的確是免疫組化“新手”,他們只注重如何做和較好終的結果,但對為什么這樣做不太感興趣。他們常按照網上所說的方法,摸索好的抗體濃度和條件后做出很漂亮的染色結果后,他們就認為自己已經掌握了免疫組化方法了,結果不求上進,更換一種新抗體后或實驗出現異常結果后就很難做出來了。當然,免疫組化對于我來說,做過很多,但也不能說什么都會,只不過我做的多了,失敗多了和思考多了,可能比新手多了解一些其中的訣竅,拿來與大家進行分享。此外,我個人經驗不可能面面俱到,還需要更多有經驗的高手一起分享、糾正和補充。在這里。
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常用染色方法
根據標記物的不同分為免疫熒光法,免疫酶標法,親和組織化學法,后者是以一種物質對某種組織成分具有高度親合力為基礎的檢測方法。這種方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗體)在細胞或亞細胞水平的定位,其中生物素—抗生物素染色法較好常用。判定分析編輯
免疫組化染色(IHC)
免疫組化染色(IHC)
從實驗結果而言,免疫組化技術服務主要涉及抗體實驗結果的描述與分析,圖片的確定與選取,相關數據的提供,上述工作是免疫組化工作的重點內容,只有嚴格的實驗設計,標準的實驗操作,專業化的結果分析才能更好的滿足客戶的要求,這點對于形式為腹水,上清,培養液之類的抗體顯得更為重要。關于上述服務內容應該在實驗開始前由雙方明確,一般而言,客戶方實驗前應提出需要什么樣的結果與分析,例如是簡要還是詳細的描述實驗結果,需要實驗數據否,圖片的數量與規格等。如果為雙盲試驗或有第三方參與,則事先申明。
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