①二代測序一般多久出結果？

二代測序（Next-GenerationSequencing，NGS）出結果的時間會受到多種因素的影響，一般在數天到數周不等。

1、樣本類型和質量

不同的樣本類型處理時間不同。例如，血液樣本相對容易處理，提取DNA的過程比較常規。如果是組織樣本，可能需要先進行樣本的解離等復雜操作。如果樣本質量高，DNA提取和文庫構建等前期工作會比較順利，能加快整體進程。但如果樣本量少或者DNA有降解等質量問題，可能需要重新提取樣本或者進行DNA修復等操作，這會**延長時間。例如，對于新鮮血液樣本，DNA提取可能在1-2天內完成；而對于一些福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織樣本，可能需要3-5天來完成高質量DNA的提取和后續的優化處理。

二代測序是先打斷DNA，使其片段化。河南二代測序價格

對于二代測序的概念是什么？

第二代測序(Next-generationsequencing，NGS)又稱為高通量測序(High-throughputsequencing)，是基于PCR和基因芯片發展而來的DNA測序技術。我們都知道一代測序為合成終止測序，而二代測序開創性的引入了可逆終止末端，從而實現邊合成邊測序(SequencingbySynthesis)。二代測序在DNA復制過程中通過捕捉新添加的堿基所攜帶的特殊標記(一般為熒光分子標記)來確定DNA的序列，現有的技術平臺主要包括Roche的454FLX、lllumina的Miseq/Hiseg等。2005年，羅氏推出了二代測序儀羅氏454，生命科學開始進入高通量測序時代。2006年，隨著Ilumina系列測序平臺的推出，極大降低了二代測序的價格，推動了高通量測序在生命科學各個研究領域的普及。 寧夏嘉安健達二代測序二代測序是2005年以后開始的嗎？

什么樣本可以做二代測序？①

1、血液樣本

全血：這是最常見的樣本類型之一。血液中含有白細胞，其細胞核內有完整的基因組DNA。通過提取白細胞中的DNA，可以進行全基因組測序、全外顯子組測序等。例如，在遺傳病的基因診斷中，抽取患者的全血，提取DNA后，對與疾病相關的基因或整個外顯子組進行測序，以尋找致病突變。

血漿/血清：其中含有游離的DNA（cfDNA）和RNA（cfRNA）。在**患者中，腫瘤細胞會釋放其DNA片段進入血液循環，這些cfDNA被稱為循環**DNA（ctDNA）。通過對血漿中的ctDNA進行測序，可以實現**的早期篩查、***過程中的動態監測等。例如，對于肺*患者，檢測血漿中的ctDNA來追蹤**的基因突變情況，為靶向***提供依據。

二代測序——實驗流程類問題

二代測序的實驗流程包括哪些步驟：首先是樣本準備，提取高質量的DNA或RNA，并進行片段化處理；然后進行文庫構建，在片段兩端連接特定接頭；接著進行文庫質量檢測和定量，合格的文庫上機測序；***對測序得到的原始數據進行生物信息學分析，包括數據過濾、比對、變異檢測等。文庫構建的關鍵步驟和注意事項有哪些：關鍵步驟包括DNA片段化的程度控制、接頭連接的效率和特異性、文庫的純化和定量等。需要注意避免樣本的污染，確保片段化的均勻性，優化接頭連接反應條件，以及準確地進行文庫定量，以保證文庫的質量和測序結果的準確性。 二代測序常用于產前的檢測或診斷。

二代測序的建庫步驟③

三、末端修復和加A尾（以DNA文庫為例）

末端修復：經過片段化后的DNA末端可能是不平齊的，有5'-突出端或3'-突出端。末端修復反應可以利用T4DNA聚合酶、Klenow片段等酶，將這些末端補平，使其成為平末端。T4DNA聚合酶具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性，在合適的反應緩沖液和dNTP（脫氧核糖核苷三磷酸）存在下，可以將突出的末端補平。

加A尾：在末端修復后的平末端DNA分子的3'-末端加上一個A堿基。這一步是為了后續連接帶有T-突出端的接頭做準備，一般使用Klenow片段（3'→5'外切酶活性缺失）在dATP存在下進行加A反應，這樣可以使DNA片段能夠高效地與帶有T-突出端的測序接頭連接。 二代測序廣泛應用于個性化醫學。河北二代測序應用

二代測序的成本比一代測序高嗎？河南二代測序價格

二代測序的建庫步驟⑥

六、文庫質量檢測

定量檢測：使用熒光定量PCR（qPCR）或其他核酸定量方法（如Qubit）來確定文庫的濃度。Qubit是一種基于熒光染料與核酸特異性結合的定量方法，它可以準確地測量DNA或RNA的濃度，并且對不同大小的核酸片段有較好的定量準確性。通過定量檢測，可以了解文庫的產量，為后續的測序上樣量提供參考。

片段大小檢測：利用瓊脂糖凝膠電泳或生物分析儀（如Agilent2100Bioanalyzer）來檢測文庫片段大小。瓊脂糖凝膠電泳是一種傳統的方法，通過將文庫樣品在瓊脂糖凝膠中進行電泳，根據DNA片段在電場中的遷移速度來判斷片段大小。生物分析儀則可以提供更精確的片段大小分布和濃度信息，它是基于微流體芯片技術，能夠快速、準確地分析文庫質量。 河南二代測序價格

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