激光掃描共聚焦顯微鏡（LaserScanningCon-focalMicroscope，LSCM）是20世紀80年代發展起來的一種新型高精度顯微鏡。它在普通熒光顯微鏡的基礎上加裝激光掃描裝置，使用可激發的熒光探針，采用敏感的光電倍增管作為檢測器，利用計算機控制掃描反射鏡并進行圖像采集、處理和分析。激光掃描共聚焦顯微技術不僅可用于觀察各種固定的細胞和結構，還可對活細胞的形態、結構和離子的變化進行實時動態觀察和測定。目前，這種技術已用于細胞形態定位、三維結構重建、細胞內離子動態變化過程等研究，并與定量熒光測定、定量圖像分析等實用研究手段和技術相結合，在形態學、生理學、免疫學、遺傳學等分子細胞生物學領域得到廣泛應用。 雙光子顯微鏡使用時，需要注意哪些問題呢？河南生物顯微鏡質量推薦

通常來說國產顯微鏡與進口顯微鏡有如下不同之處：

1、 價格， 國產顯微鏡價格低廉， 一般從幾千到幾萬價格不等， 比較適合檢驗要求不高，

設備資金有限的中小企業。 進口顯微鏡通常是從幾萬到幾十萬， 因廠家和型號的不同價格變

化較大， 主要使用于檢驗要求較高采購資金比較充裕的中大型企業。

2、 產品質量， 雖然國產設備還在發展進步， 但真實的講產品質量和技術方面與國外進

口的差距還是很大的， 個人認為短期內是無法追趕上了。

3、 光學系統： 國產顯微鏡大多數采用的是有限遠光學系統， 因此產品的功能都比較簡

單， 部分**產品采用的是無限遠光學系統， 但相關技術還不是很成熟。 進口廠家采用的都

是無限遠光學系統， 其中德國蔡司公司的 ICCS 光學系統**為先進。 四川生物顯微鏡質量推薦激光掃描共聚焦顯微鏡常見故障及相應解決方法。

3． 雙光子顯微鏡的激光器有何特別之處？

雙光子吸收幾率依賴于兩個入射光子在空間和時間上的重合程度（兩個光子必須在 10－18 秒內到達） 。 雙

光子吸收截面很小， 只有在具有很大光子流量的區域的熒光團才會被激發。 因此所用激光器多為鈦寶石激

光器， 可以達到皮秒或者飛秒級的掃描速度， 且具有非常高的峰值功率和較低的平均功率， 從而可以減小

或者消除光漂白和光毒作用。 **主要的是在一個很小的范圍提供非常高密度的光子， 可以保證雙光子的同

時激發。

    掃描探針顯微鏡（SPM） 是近幾十年在表面特征表面形貌觀測方面**重大的成果之一。

   1966 年 Russell Young 提出可以利用金屬探針與樣品之間的微弱電流來對樣品的表面形

貌進行表征， 并在 1971 年聯名他的合作者在《物理評論快報》 上提出了這種探針式表面測

量儀， 測量儀的基本原理是通過探針與樣品之間的電流大小來體現探針與樣品之間的間距。

在之后的 1972 年， Young 給出了探測儀的具體結構與應用實例， 這是掃描探測顯微鏡的雛

形。

1978 年， 蘇黎世研究所的兩位物理學家系統論證了掃描隧道顯微鏡， 并于 1981 年把實

體研制成功， 觀察到了 Si（111） 的表面原子結構。 這個表面物理探測器的工作原理是量子

隧穿效應。 當金屬探針與樣品之間的距離只有幾納米的時候， 會產生隧穿電流， 而這個隧穿

電流對于距離十分敏感， 當距離變化 0.1 納米時隧穿電流會發生量級的變化。 借助這個效應，

掃描隧道顯微鏡的垂直分辨率高達 0.01nm， 放大倍數達到了幾億倍。 借此， 人類得

到了原子圖像， 對于其周邊學科有著里程碑式的意義。 其研發者 G.Binning 和 H.Rohrer 也由

此獲得了 1986 年的諾貝爾物理學獎。

雙光子顯微鏡常見故障及相應解決方法。

在空氣的環境下， 用壓電晶體微懸臂的共振頻率或接近這一頻率

來振蕩懸臂， 從而實現了 輕敲模式的成像原理。 當針尖未與表面接觸

時， 壓電的運動產生了 懸臂大振幅的振蕩。 。 振蕩的針尖朝向樣品表面

運動直到針尖開始輕輕地接觸到樣品或敲擊到表面。 微懸臂的振蕩就

會由于針尖與表面接觸引起的能量的損失而必然地下降。 這種振幅交

替下降用于檢測并測量表面形貌。

檢測器測量到這些交替變化的振幅值, , 再通過反饋回路, , 調整針尖

與樣品之間的距離， 保證振幅恒定在某一個恒定值, , 這樣針尖在掃描

過程中的運動軌跡就反映了 樣品的表面形 貌 雙光子顯微鏡的歷史。四川正規顯微鏡需要多少錢

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    實際上，衍射極限是一種遠場(far-field)效應，在近場(near-field)條件下無效。因此早期的一些嘗試突破光學衍射極限的努力都是基于近場光學成像的。像這次諾貝爾獎得主EricBetzig就早在1993年發展了掃描近場光學顯微鏡，實現了室溫下的單分子超分辨率成像。然而，近場光學顯微鏡無法用于細胞內部的成像，因此在生物領域的應用一直沒有發展起來。后期的各種“突破”光學衍射極限的努力都是在遠場條件下發展起來的。超分辨率顯微成像一般指在遠場條件下基于熒光的、“突破”衍射極限的光學顯微成像技術。熒光是物質吸收光照后發出的一類光。物質分子中的電子分布在不同的能級上。當一束光打到分子，分子具有一定的概率吸收光子，同時其處在基態的電子會躍遷到更高能量的激發態能級。處在激發態的電子有多種途徑回到基態，其中一條途徑就是發出一個光子(熒光)，釋放能量回到基態。 河南生物顯微鏡質量推薦

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