Leibovitz’sL-15培養基的緩沖系統由磷酸鹽和游離堿基氨基酸組成,代替了傳統的碳酸氫鈉緩沖系統,同時,用半乳糖和**酸鈉代替葡萄糖可以防止酸性代謝副產物的形成,有助于維持培養液PH的穩定,適合用于非CO2平衡環境的細胞培養。Leibovitz’sL-15培養基適用于猴腎細胞和HEP-2的培養、原代(如胚胎和成人組織)細胞分離、多種病毒的培養以及神經元的培養等。NEAA(非必須氨基酸),是在MEM培養基的基礎上添加L-丙氨酸、L-谷氨酸、L-天(門)冬酰胺、L-天(門)冬氨酸、L-脯氨酸、L-絲氨酸和甘氨酸7種NEAA,能降低細胞培養時細胞自身生產非必須氨基酸的副作用,有效促進細胞增殖代謝。酚紅在培養基中被用來作為PH值的指示劑,用以持續監測培養液的酸堿度,在低PH值時酚紅使培養液呈黃色,而較高的PH值時使培養液呈紫色,PH值~,適合細胞培養。但酚紅也有一些缺點,研究表明酚紅可以模擬固醇類(特別是雌)的作用,因此在用到雌敏感的細胞時(如乳腺組織),較好使用不含酚紅的培養基。酚紅會干擾流式細胞分析時候的檢測。此外,一些無血清培養基的配方中若存在酚紅會干擾鈉-鉀平衡。 Dulbecco’s 改良培養基增加了非必須氨基酸、微量鐵離子以及**酸鈉。iclean細胞培養基全國發貨
培養液的滲透壓是一個非常重要的因素,細胞通常可耐受260mOsm/kg~320mOsm/kg。標準培養液的滲透壓在此范圍內波動。特別注意:向培養液中加入其它物質有可能會明顯改變培養液的滲透壓,特別是溶于強酸或強堿中的物質。向培養液中添加HEPES時需按以下方法調節鈉離子濃度。緩沖系統大多數細胞所需pH在-。但是,細胞培養適pH值隨培養的細胞種類不同而不同。成纖維細胞喜歡較高pH(-),而傳代轉化細胞系則需要偏酸pH(-)。由于多數培養液靠碳酸氫鈉(NaHCO3)與CO2體系進行緩沖,因此,氣相中的CO2濃度應與培養液中碳酸氫鈉濃度相平衡。如果氣相或培養箱空氣中CO2濃度設定在5%,培養液中NaHCO3的加入量為;如果CO2濃度維持在10%,培養液中NaHCO3的加入量為。細胞培養瓶蓋不應擰得太緊,以保證氣體交換。HEPES是一種非離子緩沖液,在pH-范圍內具有較好的緩沖能力,但是非常昂貴,在高濃度時對一些細胞可能有毒。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉()共用,以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加。在這種培養條件下,細胞培養瓶的蓋子應擰緊,以防止培養液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中。大多數培養液中含有酚紅作為pH指示劑,酸性培養液呈橙黃色,堿性培養液呈深紅色。安徽RPMI-1640細胞培養基廠家McCoy’s5A培養基是改良的Basal Medium5A,McCoy’s 5A含有還原型谷胱甘肽、細菌蛋白胨以及高濃度的葡萄糖。
細胞培養基的種類按照細胞培養基的發展歷史,細胞培養基大致可分為平衡鹽溶液、天然細胞培養基、合成細胞培養基、無血清細胞培養基、限定化學成分細胞培養基等幾大種類。(balancedsaltsolution,BSS)BSS主要是由無機鹽、葡萄糖組成,它的作用是維持細胞滲透壓平衡,保持pH穩定及提供簡單的營養。其主要用于細胞的漂洗、配制其他試劑等。幾種常用的BSS配方如下(表1-1)。D-Hank's與Hank's的一個主要區別是前者不含有Ca2+和Mg2+,因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因為Ca2+、Mg2+是細胞膜的重要組成成份,參與細胞粘附等功能,使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免細胞結團。此外,Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎溶液,前者緩沖能力較弱,適合于密閉培養;后者緩沖能力較強,適合于5%CO2的培養條件。表1-1幾種常用的BSS配方。
成分說明:貨號L-谷氨酰胺L-丙氨酰-L-谷氨酰葡萄糖HEPES酚紅雙抗HCY-BCM07001★★★HCY-BCM07001A★★★★HCY-BCM07002★★★★HCY-BCM07002A★★★★★HCY-BCM07003★★★HCY-BCM07004★★HCY-BCM07005★★★HCY-BCM07006★★★★HCY-BCM07007★★HCY-BCM07008★★★HCY-BCM07009★★HCY-BCM07010★HCY-BCM07011★★HCY-BCM07012★★★HCY-BCM07013★★HCY-BCM07014★HCY-BCM07015★★HCY-BCM07016★★★HCY-BCM07017★HCY-BCM07018★★HCY-BCM07019★HCY-BCM07020HCY-BCM07021★★HCY-BCM07022★HCY-BCM07023ATCC改良HCY-BCM07024Dutch改良HCY-BCM07025不含葉酸HCY-BCM07026不含蛋氨酸不含葡萄糖不含酚紅HCY-BCM07027SILACRPMI-1640FlexHCY-BCM07028SILACRPMI-1640RPMI-1640細胞培養基L-谷氨酰胺(Glutamine)是細胞培養中所必需的一種營養元素,但其在溶液中不穩定,會自發降解,不含L-谷氨酰胺的培養基,可以根據研究需要任意調整L-谷氨酰胺的用量,在使用時添加新鮮的L-谷氨酰胺或其替代物更利于細胞的生長。L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(Alanyl-glutamine,Ala-Glu),又名丙氨酰谷氨酰胺、丙谷二肽,是一種高級細胞培養添加劑,可直接替代細胞培養基中的L-谷氨酰胺。McCoy’s 5A常用于多種類型的原代細胞的培養,如骨髓、皮膚、牙齦、腎、脾、肺、大鼠胚胎、網膜等。
Dulbecco’s改良培養基–DMEM(Dulbecco’sModifiedEagleMedium)是在MEM培養基的基礎上研制的,與MEM培養基相比,氨基酸的含量增加了2倍,維生素的含量增加了4倍,同時還增加了非必須氨基酸、微量鐵離子等。DMEM培養基**初設計葡萄糖含量為1000mg/L(低糖型),后來又發展出葡萄糖含量為4500mg/L(高糖型),現已廣泛應用于各種細胞的培養。高糖型培養基普遍應用于生長快、粘附性低的細胞、雜交瘤的骨髓瘤細胞、克隆細胞、DNA轉染的轉化細胞、各種原代病毒宿主細胞、單一細胞的培養以及疫苗的生產,例如利用CHO細胞表達EPO和生產乙肝疫苗。低糖培養基更適合代謝作用較慢、依賴性貼壁細胞的培養。不含葡萄糖的培養基可以根據研究需要,隨意調節葡萄糖的濃度,方便快捷。L-谷氨酰胺(Glutamine)是細胞培養中所必需的一種營養元素,但其在溶液中不穩定,會自發降解,不含L-谷氨酰胺的培養基,可以根據研究需要任意調整L-谷氨酰胺的用量,在使用時添加新鮮的L-谷氨酰胺或其替代物更利于細胞的生長。 Ham’s F-12常作為無血清培養的基礎培養液,在低血清含量下時,特別適合單細胞培養和克隆化培養。安徽RPMI-1640細胞培養基廠家
Leibovitz’s L-15培養基的緩沖系統由磷酸鹽和游離堿基氨基酸組成,代替了傳統的碳酸氫鈉緩沖系統。iclean細胞培養基全國發貨
DMEM,即 Dulbecco 改良的 Eagle 培養基,在細胞培養領域占據著極為重要的地位。它源于經典的 Eagle 培養基,經科學家 Dulbecco 改良優化后,煥發出全新活力。DMEM 培養基成分豐富,氨基酸濃度是原始 Eagle 培養基的兩倍,還涵蓋了非必需氨基酸,為細胞蛋白質合成筑牢根基。其維生素含量亦是 Eagle 培養基的四倍之多,積極參與細胞內各類代謝反應,助力細胞維持正常生理功能。同時,培養基中包含酸,這一糖酵解途徑的關鍵物質,在細胞能量供應方面發揮著重要作用,時刻為細胞的生命活動提供動力支持。iclean細胞培養基全國發貨
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