PLL(聚L -賴氨酸)是生理條件下帶正電的多氨基酸,當鏈長超過20個殘基時,它可以與質粒DNA結合并凝聚成致密顆粒。研究人員發現,配體在PLL上的共價附著可通過受體介導的途徑***增強內吞作用。例如,涎腺樣體(ASOR)是涎腺糖蛋白受體的配體,在肝細胞上表達。當ASOR共價附著在PLL上時,受體介導的內吞作用和質粒的細胞攝取***增加。此外,與葉酸或轉鐵蛋白相關的PLL已被開發出來,并在將pDNAs轉染到*細胞中取得了實質性進展。另一種重要的聚氨基酸是PLO(聚L-鳥氨酸)。PLO具有PLL的特性,但轉染效率比PLL提高了10倍。Ramsay和Gumbleton證明,與PLL相比,PLO以更低的電荷(+/?)比率凝聚pDNA,并且在相同的多陽離子/pDNA質量比下,PLO/pDNA復合物比PLL/pDNA復合物更耐破壞。然而,由于其介導內體逃逸的能力較差,帶正電的多氨基酸的轉染效率仍然很低。脂質復合物又稱陽離子脂質-核酸復合物(CLNACs)。貴州脾轉染試劑
隨著寡核苷酸生物合成產業的發展,不同類型的修飾寡核苷酸也被引入市場,以提高小RNA寡核苷酸轉染的效率。其中一種是通過化學修飾來提高其與靶標和阻斷外切酶活性的結合親和力的agomirs和antagomirs。agomir是一種人工修飾的雙鏈miRNA模擬物,旨在發揮比傳統miRNA模擬物更高的靶標抑制活性(krtzfeldt另一方面,antagomir是一種專門設計的單鏈miRNA類似物,旨在抑制特定的miRNA。agomir和antagomir都被認為更穩定、更有效、更特異,而且與正常的模擬物或拮抗劑相比,對宿主細胞膜具有更高的結合親和力。鎖定核酸(LNA)是另一種修飾的寡核苷酸,其至少一個核苷酸具有額外的亞甲基橋,以增強其核糖環結構的穩定性。其鎖定的核糖結構使得LNA比常用的寡核苷酸更短,從而使其比傳統的寡核苷酸表現出更高的效率、穩定性和結合親和力。NA基寡核苷酸的應用已被報道用于各種生化或功能分析,涉及遞送小RNA分子,如siRNA、miRNA和piRNA。一些基于NA基的轉染不需要轉染試劑,這可以比較大限度地減少轉染過程中試劑的二次效應。廣西轉染試劑教做肌內注射脂質體不能引起強烈的毒性反應,這與肺內或靜脈注射途徑的情況不同。
在一項將質粒DNA轉染到HUVEC中的研究中,使用包括Effectene和FuGENE 6在內的非脂質體試劑比脂質體試劑DOTAP(18%)產生了更好的轉染效率(34%和33%)。在另一項用質粒DNA轉染HUVEC的研究中,與Effectene和FuGENE 6或HD等非脂質體試劑(48小時時均<20%)相比,脂質體試劑顯示出更高的轉染效率(Lipofectamine LTX在48小時時約為38%,Lipofectamine 2000在48小時時約為23%)。在這些研究中,基于脂質體和非脂質體的試劑轉染HUVECs的效率無法得出結論,主要是由于所用試劑的范圍存在差異。然而,一致的觀察結果表明轉染效率仍然存在無論使用何種試劑,低于40%無疑暗示原代細胞是一種難以轉染的細胞類型。
脂質復合物又稱陽離子脂質-核酸復合物(CLNACs),是由非離子核酸與陽離子脂質體(CLs)表面結合,**終形成多層脂質-核酸復合物而形成的。帶負電荷的核酸被吸引到帶正電荷的囊泡表面,**初與停靠在陽離子囊泡表面的核酸分子形成復合物,然后發展到核酸分子持續粘在脂質分子上的階段,脂質雙分子層圍繞緊實的核脂質顆粒。復合物形態的這種異質性可能歸因于囊泡的脂質組成、復合物形成的方式、脂質:核酸比例、核酸結構的大小、試劑的批次差異以及用于處理和可視化這些復合物的技術。除了靜電吸引外,疏水相互作用被認為有助于脂質和核酸之間的復合物形成。因此,根據正電荷(陽離子脂質)與負電荷(核酸上的磷酸基)的電荷比,脂質體可能通過與細胞表面的蛋白聚糖基團等帶電殘基的靜電相互作用,或通過與質膜疏水區域的疏水相互作用進入細胞。隨著寡核苷酸生物合成產業的發展,不同類型的修飾寡核苷酸也被引入市場,以提高小RNA寡核苷酸轉染的效率。
**近一項與抗血管生成基因傳遞高度相關的發現是,陽離子脂質體(CLs)選擇性地靶向**的血管系統。陰離子或電中性脂質體沒有發現這種作用。Campbell和他的同事[95]發現,與電中性脂質體相比,使用CLs在**血管內皮細胞(VECs)中積累更多,CLs通過添加5mol%聚乙二醇來穩定。在兩種人類**類型(LS174T和MCAIV)和兩個位置(顱窗和背側皮膚褶腔)中發現了**VECs的選擇性遞送。**血管中囊泡的分布是不均勻的,這可能與該技術是否足以根除足夠數量的**VECs以實現**消退反應有關。有趣的是,注射后24小時,脂質體上50%的摩爾電荷***增加了小鼠肺部的積聚。基于病毒的轉染,或者更具體地稱為轉導,涉及使用病毒載體將特定的核酸序列帶入宿主細胞。新疆南京轉染試劑
脂質復合物(CLNACs)通過網格蛋白參與的內吞作用進入細胞。貴州脾轉染試劑
基于非病毒的轉染方法可以進一步分為物理/機械方法和化學方法。常用的物理/機械轉染方法包括電穿孔、聲孔、磁***、基因顯微注射和激光照射。電穿孔是一種常用的物理轉染方法,利用電壓瞬間增加細胞膜通透性,允許外來核酸進入。這種方法通常用于轉染原代細胞、干細胞和B細胞系等難以轉染的細胞。然而,使用高壓可能導致細胞壞死、凋亡和長久性細胞損傷。超聲輔助轉染或超聲穿孔涉及使用微泡技術在細胞膜上制造孔,以減輕遺傳物質的轉移,而激光照射輔助轉染使用激光束在質膜上制造小孔,允許外來遺傳物質進入。與電穿孔一樣,超聲穿孔和激光輔助轉染也有破壞細胞膜和不可逆細胞死亡的風險。相比之下,磁輔助轉染,或使用磁力來幫助轉移外來遺傳物質的磁轉染,似乎對生物的破壞性較盡管效率較低,但對宿主細胞的破壞較小。另一方面,基因顯微注射涉及使用特定的針刺穿細胞,將所需的核酸注射到宿主細胞的細胞核中。然而,這項技術需要經過專門訓練的人員或機器人系統,他們可以高精度地執行程序,以防止細胞損傷,因此在基因***等臨床應用中具有重要價值。與物理或機械轉染方法相比,化學轉染涉及使用專門設計的化學品或化合物來幫助將外源核酸轉移到宿主細胞中。貴州脾轉染試劑