此外,病毒濃度被認為是影響轉導效率的另一個因素。在Haas等人的評估中測試的其他幾個參數中,即含有不同輔助蛋白的HIV慢病毒載體構建,纖維連接蛋白片段的存在/不存在以及在人臍帶血和胚胎腎細胞的轉導培養基中添加多陽離子硫酸魚精蛋白,只有病毒滴度似乎與病毒轉導效率直接相關。轉染介質的條件也可能影響轉導效率。例如,在轉導過程中,使用胎牛血清比牛血清產生更好的轉導效率。同樣,研究表明,deae-葡聚糖等多陽離子可以比較大限度地減少帶負電荷細胞之間的排斥力,并促進病毒轉導。影響化學轉染效率的因素在聚葡萄糖、精胺(PG)偶聯物和第四代聚酰胺樹狀大分子(PAMAM G4)的幫助下。重慶深圳轉染試劑
核酸與轉染試劑的比例對轉染效率也有影響。在一項涉及原代人成肌細胞的研究中,使用不同的核酸比例來比較轉染效率的影響,轉染試劑包括FuGENE6、Effectene和ExGen500(一種基于pei的試劑)。該研究的一個***發現是,轉染效率可能不一定與所用試劑的體積直接相關。例如,2μgDNA與5μLFuGENE6試劑的比例被證明可以產生比較好的轉染效率,而更低或更高的DNA與試劑的比例并不能提高效率。在另一項涉及轉染人胃腺*細胞系的研究中也觀察到類似的發現,即在一系列組合中使用比較高轉染試劑與DNA比體積測試時,轉染效率并未達到比較好。使用不成比例的高轉染試劑量會導致不必要的細胞毒性,從而降低整體轉染結果。因此,確定合適的核酸與試劑比例是啟動新的轉染研究以實現高轉染效率和低細胞毒性的重要步驟。湖南成都轉染試劑影響物理轉染或機械轉染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。
肌內注射脂質體不能引起強烈的毒性反應,這與肺內或靜脈注射途徑的情況不同。幾項體內研究表明,pDNA載體的肺內遞送是促炎th1樣細胞因子的產生和隨后浸潤細胞涌入肺區域的原因。在任何情況下,陽離子脂質本身不會引起免疫反應,而且這種效果不是由于pDNA制備中存在內***。在一項囊性纖維化臨床試驗中,急性輕度流感樣癥狀被認為是由DNA依賴效應引起的,而對照組(*脂質組)沒有觀察到這種效應。有幾種方法可以降低載體CpG基序的免疫刺激作用。這些包括這些基序中胞嘧啶堿基的甲基化,中和序列的添加,CpG基序的消除,使用化學或生物方法的免疫抑制,將載體靶向遠離網狀內皮系統的細胞,以及抑制內粒體酸化。研究表明,系統地消除pDNA載體中約50%的CpG基序,可導致體外小鼠脾細胞和靜脈注射或鼻內滴注小鼠肺中細胞因子分泌減少。該方案還增加了轉基因表達水平。利用肌內注射等途徑,遠離網狀上皮系統進行被動靶向,也能提高轉基因表達水平。
在7種轉染試劑(DAC-30、DC-30、Lipofectin、LipofectAMINEPLUS、Effectene、FuGene 6和superect)中,FuGene 6轉染HASMCs和α-10 SMCs的效率比較高。在這兩種細胞系中,superect產生的細胞毒性作用比較高,其次是DAC-30和Lipofectamine Plus,而FuGene 6被認為對細胞系相對安全。在另一項比較人類和動物來源的不同細胞系轉染結果的研究中,豬氣管上皮細胞(PTE)被Effectene、Lipofectamine Plus和PEI等轉染試劑轉染的效率高于人類氣管上皮細胞(HTE)。化學轉染后,轉染后的HTE也表現出比PTE更低的活力。兩項被引用研究的綜合結果認為動物細胞系可能比人類細胞系更有效地轉染。懸浮細胞通常被認為比貼壁細胞更難轉染,因為轉染復合物對細胞的潛在附著減少懸浮細胞表面。然而,一項比較Xfect、Lipofectamine2000、Nanofectamin、TransIT-X2和TransIT-2020效率的研究表明,除了Xfect之外,所有試劑轉染懸浮細胞的效率都高于貼壁細胞(Tammetal.,2016)。然而,相反觀察結果背后的原因在很大程度上仍不清楚,未來可能會進一步探索。核酸與轉染試劑的比例為了在體外和體內可重復地傳遞基因和siRNA,含有核酸的脂質體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉染試劑。
基因注射包括通過注射將所需的核酸物質直接輸送到宿主細胞核中。當細胞轉染具有挑戰性時,特別是當需要對宿主細胞進行遺傳修飾時,這種方法是一種很好的替代方法。與其他非病毒基因傳遞方法一樣,沒有一種方法可以適用于所有不同的細胞類型,選擇合適的細胞類型和核酸大小對于確保基因注射的成功至關重要。例如,先前的一項研究報道了成功生成表達cre重組酶(大小~1,000bp)的轉基因小鼠細胞系。另一方面,在一項體內研究中,表達轉基因的小鼠肌纖維數量與注射次數和給藥質粒劑量相關。另一項體外研究進一步支持了這一觀點,該研究報道了表達報告基因的宿主細胞的數量與注入細胞的核酸量密切相關。此外,微針的大小、形狀和額外涂層的存在也會影響基因注射的效率,因為有報道稱,涂有微顆粒的小尺寸微針(<10毫米)能夠順利地將所需的貨物輸送到皮膚的角質層。PHP是由天然來源的羥基脯氨酸(如膠原蛋白、明膠和其他蛋白質)制成的,是一個用作基因載體的聚酯。吉林轉染試劑試用
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化學轉染的效率在很大程度上取決于幾個因素,如使用的試劑類型、靶細胞的來源和性質,以及選擇的比較好DNA與試劑比例。慢病毒等病毒載體能夠攜帶大尺寸的核酸,并將其靶標傳遞給非分裂細胞和分裂細胞,因此在基因***中非常有用。有幾個因素已被證明可能影響病毒轉導的效率,如靶細胞類型、使用的啟動子類型、載體濃度和使用的轉導介質條件。在一項評估使用人類免疫缺陷病毒(HIV)和馬傳染性貧血病毒(EIAV)進行基因轉導的體外研究中,觀察到這兩種病毒在來自人類、倉鼠、貓、狗、馬和豬的不同細胞系上的不同程度的效率。在大多數細胞類型上,使用HIV的轉導效率普遍優于EIAV,而這兩種病毒對嚙齒動物細胞的***性較弱。在同一項研究中,啟動子的類型也被認為是可能影響轉導效率的一個因素,因此含有替代CMV啟動子的內部啟動子EF-1a的HIV在小鼠和大鼠細胞上表現出更高的轉導效率。重慶深圳轉染試劑