做免疫組化時如何選擇一抗? 1、單克隆和多克隆抗體的選擇。由一種克隆產生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標明確地與單一的特異抗原決定簇結合,就像導彈精確地命中目標一樣。另一方面,即使是同一個抗原決定簇,在機體內也可以由好幾種克隆來產生抗體,形成好幾種單克隆抗體混雜物,稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應中,一般單克隆抗體特異性強,但親和力相對小,檢測抗原靈敏度相對就低;而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強,靈敏度高,但易出現非特異性染色(可以通過封閉等避免)。 2、應用范圍的選擇。有的一抗只能用于Westernblotting,或免疫組化、免疫熒光、免疫沉淀等;甚至標明...
免疫組化結果背景染色較深的原因有哪些? (1)抗體濃度過高:一抗濃度過高是常見的原因之一。解決辦法是,每次使用新抗體前應當對其工作濃度進行測試,使每一抗體個體化,找到適合自己實驗室的理想工作濃度,既使是即用型的抗體也應如此,不能只簡單的按說明書進行染色。 (2)抗體孵育時間過長或溫度較高:解決辦法是,嚴格執行操作規程,比較好隨身佩帶報時表或報時鐘,及時提醒,避免因遺忘而造成時間延長。現在流行的二步法(Polymer)敏感性很高,要求一抗孵育的時間不是傳統的1小時,而是30分鐘,因此,要根據染色結果進行調整。 (3)DAB變質和顯色時間太長:DAB比較好現用現配,如有沉...
免疫組化實驗流程介紹: 英瀚斯生物為您整理總結免疫組化詳細步驟: 1、SP三步法 1)石蠟切片,常規脫蠟至水。 2)0.3%或3%H2O2去離子水(無色液體)孵育10-30分鐘,以滅活內源性過氧化物酶活性。 3)蒸餾水沖洗,PBS浸泡5分鐘 4)候選步驟:采用抗原修復:微波(建議30分鐘內4次中火)、高壓、酶修復方法。自然冷卻,再用3分鐘×3次. 5)血清封閉:室溫15-30分鐘,盡可能與二抗來源一致。傾去,勿洗。 6)滴加適當比例稀釋的一抗,37℃孵育2~3小時或4℃過夜(比較好復溫)。PBS沖洗,3分鐘×5次。 7)滴加生物素標記的...