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細胞基因藥物的基因遞送有病毒及非病毒兩種方式，其中病毒遞送更為常用。在病毒遞送路徑中，腺相關病毒（AAV）和慢病毒（Lentivirus）是常用的兩種載體；差別是病毒基因組的存在形式，AAV的基因組一般不整合到染色體中，以游離形式存在于染色體之外，且一般會表達...

在傳統生物技術行業（如抗體、疫苗領域）使用的下游純化工藝步驟，已經用于慢病毒的大規模下游處理。主要是基于膜(過濾/澄清，利用切向流過濾TFF進行濃縮/滲濾，基于膜的色譜)和色譜(離子交換色譜IEC，親和色譜AC，體積排阻色譜SEC)的技術。這些不同的過程步驟的...

在抗體藥物及核酸藥物領域，倍篤生物產品線涵蓋藥物研發的全流程，主要用——RNA轉染試劑、生物活性物質純化分離用填料產品、ADC的payload抗體（如anti-DXD、anti-Eribulin、anti-MMAE等）、動物造模用陽性及陰性抗體、泊洛沙姆P 1...

慢病毒載體既可以轉導分裂細胞也可以轉導非分裂細胞，被認為是安全的，并且可以提供長期的轉基因表達，是目前較通用的基因轉移方法之一。因慢病毒載體能有效地轉導靶細胞，如造血干細胞和T細胞，在細胞和基因藥物中的應用越來越guang泛。源自人類胚胎腎細胞的HEK293細...

文章作者對酶法去除dsDNA進行了優化研究，兩種酶濃度梯度為25U/ml、50U/ml及100U/ml，Mg2+濃度為5mM，通過PicoGreen檢測dsDNA含量。結果發現，25U/ml的M-SAN HQ中鹽核酸酶對dsDNA去除效果明顯優于100U/ml...

宿主細胞DNA（HCD）殘留以染色質形式存在，其中有帶負電荷的DNA、帶正電荷及疏水區段的組蛋白，就像膠帶一樣能夠吸附很多物質，包括各種雜蛋白、色譜填料、目的病毒顆粒。非特異吸附雜蛋白，會影響蛋白雜質（如HCP）等的去除；吸附到色譜填料上，會降低色譜分離純化效...

市售的SAN HQ高鹽核酸酶有三個規格，分別是25kU、500kU及5MU，分別滿足研發初期及大規模生產各階段的要求。通過SDS-PAGE檢測蛋白純度在98%以上。基于ArcticZymes Technologies的30年的酶學開發及大規模生產經驗，SAN ...

對于含包膜的病毒載體，如慢病毒LV、逆轉錄病毒RV等，在細胞培養上清液中收獲。而M-SAN HQ中鹽核酸酶，作為市場上更適合生理鹽條件的核酸酶，所以，M-SAN HQ成了包膜病毒載體生產的更好選擇。優勢在于：1. M-SAN HQ兼容多種細胞培養體系，在細胞培...

通過三質粒瞬轉體系生產病毒載體，會引入宿主細胞DNA殘留（HCD）、蛋白殘留（HCP）、工藝雜質（如antibiotics、核酸酶等外源物質）等污染，存在潛在的致瘤性和免疫原性等風險。藥品監管機構一般允許生物制品中存在10ng/dose以下的殘留DNA。此外，...

基因藥物常用的AAV載體有三種生產方法，分別是三質粒瞬轉體系、桿狀病毒表達載體體系和包裝細胞體系。其中，20多年前開發的三質粒瞬轉表達技術仍然占據腺相關病毒AAV生產的主流地位，其三質粒分別是Helper質粒（含E2a/b、E4和VARNA基因）、目標基因表達...

殘留的宿主DNA是生產中產生的雜質，其存在潛在的致瘤性、傳染性和免疫原性等風險。相關研究表明，基因的大小普遍在200bp以上，因此大于200bp有可能會有一定的致病性，而且殘留DNA片段越大，生物制品的風險等級越高。因此，各國監管機構對其提出了嚴格要求。美國食...

染色質由組蛋白和DNA組成，——147個堿基對的DNA纏繞在8個組蛋白（由H2A、H2B、H3和H4形成的八聚體）周圍，形成基本的染色質單位，即核小體。核小體像珠串一樣串連在一起，并被包裝成更高階的染色質結構。DNA帶負電荷，富含堿性氨基酸的組蛋白帶正電荷，且...

倫敦大學學院（UCL）的工藝開發團隊，在細胞藥物Car-T涉及的慢病毒（Lentivirus，LV）生產過程中，比較了Benzonase和M-SAN HQ中鹽核酸酶在酶活、酶切時間、各階段LV的穩定性等方面的表現，發現在生理鹽條件下M-SAN HQ中鹽核酸酶酶...

大多數研究級別的慢病毒是通過批次濃縮而不是粗制劑之后應用的，濃縮基本上是通過兩步離心法產生的。在70000g通過超速離心濃縮后的慢病毒再通過蔗糖緩沖(50000g)純化，然后溶解在配方緩沖液中。一種改進，特別是純度方面的改進，基于離心/色譜聯用的純化方法。例如...

一般來說，生物生產工藝用的核酸酶以BenzonaseTM（BenzonaseTM是Merck的注冊商標）為主，能高效降解任何形式（雙鏈、單鏈、線狀、環狀）的DNA和RNA。該酶來自于大自然界普遍存在的S.Marcescen，通過E.coli發酵生產得到。該酶的...

ArcticZymes Technologies成立于20世紀80年代后期，總部位于挪威北部的特羅姆瑟(Troms?)；立足北極海洋區，致力于從海洋生物中識別新的冷適應酶，用于分子研究、體外診斷和藥物領域。以其產品的獨特性質及超過30年的生產經驗積淀，Arct...

ArcticZymes廠家對鹽活性核酸酶系列產品（Salt Active Nucleases，SANs）的生產及質控，在符合ISO13485:2016體系基礎上，增加了cGMP質控標準，如microbes、endotoxin、蛋白酶等，符合USP-EP要求。廠...

ArcticZymes Technologies產品大都來源于深海microbes中，具有一些共同的特性。1. 熱不穩定性，使酶產品相對容易失活，簡化工作流程，方便自動化過程；2. 低溫活性，即在低溫或常溫下具有更高活性，縮短酶與底物的孵育時間，提高反應速度及...

細胞基因藥物的基因遞送有病毒及非病毒兩種方式，其中病毒遞送更為常用。在病毒遞送路徑中，腺相關病毒（AAV）和慢病毒（Lentivirus）是常用的兩種載體；差別是病毒基因組的存在形式，AAV的基因組一般不整合到染色體中，以游離形式存在于染色體之外，且一般會表達...

在不同的鹽濃度條件下，AAV病毒載體的存在形式不同。低鹽濃度條件下，AAV病毒顆粒表面會通過電荷作用等非特異結合到HCD上，從而產生病毒顆粒團聚現象。隨著溶液鹽濃度上升，AAV病毒顆粒與HCD的離子相互作用會被破壞，AAV病毒顆粒會逐漸解離。當鹽濃度升到更高范...

經典的慢病毒載體（LV）的生產工藝如下，——三質粒系統瞬時轉染HEK293細胞系，轉染24小時后LV由轉染陽性細胞生產并排出到培養上清液中；收獲上清培養液后，加入核酸酶去除HCD污染，通過澄清步驟去除大的細胞碎片等雜質；下游純化步驟分離LV載體，純化方法包括切...

上海倍篤生物科技有限公司（簡稱“倍篤生物”），由中國科學院及生物醫藥產業界人士，于2018年1月共同創立。公司代理多個品牌的儀器、試劑及耗材，遵守相關法規要求，如cGMP規范、ISO13485質量管理體系認證等，致力于為診斷領域如分子診斷及病原微生物檢測研發等...

ArcticZymes Technologies有兩條產品線，分別針對分子診斷和生物藥物生產兩個領域。在分子診斷領域，產品有蝦堿酶（SAP）、UNG酶、等溫擴增酶（IsoPol）、連接酶、蛋白酶、內切核酸酶及外切核酸酶等，涉及核酸抽提、擴增及測序等應用。在生物...

ArcticZymes Technologies產品大都來源于深海microbes中，具有一些共同的特性。1. 熱不穩定性，使酶產品相對容易失活，簡化工作流程，方便自動化過程；2. 低溫活性，即在低溫或常溫下具有更高活性，縮短酶與底物的孵育時間，提高反應速度及...

從國內來看，由于 AAV 基因藥物研發管線絕大部分集中在眼科遺傳病上，載體用量較小，三質粒共轉染 AAV 系統足以滿足未來的臨床及商業需求，因此，國內的 AAV 生產系統主要以三質粒為主。然而，考慮到未來 AAV 基因藥物在血液、神經系統、肌肉系統等領域的臨床...

病毒載體作為細胞藥物生產的關鍵原材料，直接關系到細胞產品質量。載體質量的控制和工藝穩定性和批間一致性都是關系到產品能否產業化的關鍵。在生產純化過程中，需要去除上游過程中的培養基成分、誘導劑、宿主蛋白和核酸等雜質，但是由于逆轉錄病毒顆粒比較大，高異質表面糖蛋白，...

經典的慢病毒載體（LV）的生產工藝如下，——三質粒系統瞬時轉染HEK293細胞系，轉染24小時后LV由轉染陽性細胞生產并排出到培養上清液中；收獲上清培養液后，加入核酸酶去除HCD污染，通過澄清步驟去除大的細胞碎片等雜質；下游純化步驟分離LV載體，純化方法包括切...

Medium-Salt Active Nuclease High Quality (M-SAN HQ，中鹽核酸酶)，是用Pichia pastoris表達的重組非特異內切核酸酶，廣泛應用于生產工藝流程中，在生理鹽條件下去除雙鏈及單鏈的DNA及RNA。這款核酸酶...

桿狀病毒表達載體體系Baculovirus/Sf9(Baculovirusexpression vector，BEV)，是應用桿狀病毒表達載體(BEV)系統infect昆蟲細胞Sf9，是一種替代哺乳動物包裝細胞系的生產方案。整個系統包含兩種BEV，其中一個BE...

文章作者按照經典的慢病毒載體生產流程操作，在融化、核酸酶消化、澄清、超濾等步驟留樣，分別檢測dsDNA濃度及功能性LV病毒滴度。經過分析發現，——1.dsDNA去除主要發生在澄清環節，能去除dsDNA的80%-90%；2. M-SAN HQ中鹽核酸酶比Benz...