外泌體(exosomes,Exos)是細胞分泌的一種膜囊泡,因其可以將供體細胞的信息通過其攜帶的蛋白質、mRNA、miRNA等傳遞到受體細胞,實現細胞之間的信息交流及物質交換,并且可以作為藥物載體轉運藥物而引起科學家的普遍關注(Fig1)。外泌體作為內源性的天然藥物載體有著獨特的優勢,表面由脂質和蛋白質組成,使其可以穿透許多生物膜,提高藥物的運輸效率和靶向性,可以穩定存在于血液中,納米級尺寸明顯增強藥物在瘤部位的滲透滯留效應(permeabilityandretentioneffect,EPR)。目前,許多抗藥物、基因藥物及藥物均被成功載入外泌體。但是由于沒有較好的外泌體分離純化和載藥的方法,使得其作為藥物載體的應用受到限制。外泌體的提取方法:色譜法。南京外泌體提取試劑
外泌體與神經退行性疾病:外泌體可能促進或限制大腦中未折疊和異常折疊的蛋白質的聚集。AD病人腦脊液外泌體中均可檢測到Tau和Aβ蛋白。類似的現象也在PD和ALS疾病中發現。PD病人腦脊液外泌體可檢測到α-synuclein,ALS病人外泌體中也可以檢測到SOD1或TDP-43。外泌體與疾病診斷(應用潛能):外泌體生成機制表明,通過分析外泌體的組分,可以幫助識別其來源的細胞類型。這一特性已被應用于開發心血管疾病,神經系統疾病和一些病癥的分子診斷方法,也在肝腎肺相關疾病中進行研發測試。將沉淀物用PBS緩沖液進行懸浮,使外泌體懸浮于液體上層珠海正規外泌體提取試劑進貨價一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標。
外泌體的提取的方式:1、免疫磁珠法,這種方法可以保證外泌體形態的完整,特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設備,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,不便進行下一步的實驗。2、PS親和法,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態完整,純度較高。由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細胞共培養和體內注射。2016.9《ScientificReports》雜志發表了該方法較新數據,表明PS法可提取相當高純度的外泌體。六是色譜法,這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設備,應用不普遍。
由于外泌體的特殊結構和功能,使得它具有潛在的應用價值,一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標,另一方面也可以作為治病手段,未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床治病。外泌體的分離純化一直是科研工作者關注的問題,獲得高純度的外泌體對后續的研究至關重要。據了解,目前人們多采用超速離心、免疫磁珠、超濾、沉淀或試劑盒等方法實現外泌體的提取分離。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(如細胞因子、生長因子)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質,在體內參與細胞通訊、細胞遷移、促血管新生和抗一些病癥免疫等生理過程,與多種疾病的發生和進程密切相關。對外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創診斷的開發。
外泌體的提取分離:1、超速離心法(差速離心)。超離法是常用的外泌體純化手段,采用低速離心、高速離心交替進行(如圖所示),可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單,獲得的囊泡數量較多而廣受歡迎,但過程比較費時,且回收率不穩定(可能與轉子類型有關),純度也受到質疑;此外,重復離心操作還有可能對囊泡造成損害,從而降低其質量。2、密度梯度離心。在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續分布的密度階層,是一種區帶分離法。通過密度梯度離心,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,耗時。外泌體提純試劑盒的特色與優勢:樣本輸入量多樣。南京外泌體提取試劑平均價格
由于外泌體的特殊結構和功能,使得它具有潛在的應用價值。南京外泌體提取試劑
外泌體,是一種能被大多數細胞分泌的微小膜泡,具有脂質雙層膜結構,直徑大約40-100nm。盡管外泌體較初在1983年就被發現,但人們一直認為它只是一種細胞的廢棄物。然而較近幾年,人們發現這種微小膜泡中含有細胞特異的蛋白、脂質和核酸,能作為信號分子傳遞給其他細胞從而改變其他細胞的功能。這些發現點燃了人們對細胞分泌膜泡的興趣。較近的研究發現外泌體在很多生理病理上起著重要的作用,如免疫中抗原呈遞、一些病癥的生長與遷移、組織損傷的修復等。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物。南京外泌體提取試劑