靜息狀態下大部分神經元細胞內鈣離子濃度約為50-100nM，而細胞興奮時鈣離子濃度能瞬間上升10-100倍，增加的鈣離子對于突觸囊泡胞吐釋放神經遞質的過程必不可少。眾所周知，只有游離鈣才具有生物學活性，而細胞質內鈣離子濃度由鈣離子的內外流平衡所決定，同時也受鈣結合蛋白的影響。細胞外鈣離子內流的方式有很多種，其中包括電壓門控鈣離子通道、離子型谷氨酰胺受體、煙堿型膽堿能受體（nAChR）和瞬時受體電位C型通道（TRPC）等。神經元鈣成像的原理就是利用特殊的熒光染料或鈣離子指示劑將神經元中鈣離子濃度的變化通過熒光強度表現出來，以反映神經元活性。該方法可以同時觀察多個功能或位置相關的腦細胞。鈣成像系統集成自動控制和精確計時的多模式輸入端口。浙江熒光鈣成像哪里有

包含鈣離子指示劑的細胞可以通過熒光顯微鏡(fluorescencemicroscope)觀測，然后通過CCD攝像機捕捉、記錄圖像。現在鈣成像技術主要在以下幾類神經科學研究方面有廣泛應用：1.記錄培養的神經元的活動。2.記錄腦片上神經元的活動。記錄神經元的活動。由于離體實驗本身的限制，現在越來越多的神經方面科學家傾向于做在體鈣成像實驗，希望能得到更準確且更能反應生理狀況的數據。得益于雙光子熒光顯微鏡的發展，現在在實驗動物處于huoti狀態下的鈣成像技術取得了飛速進展。4.記錄神經元樹突和樹突棘（spine）的活動。由于對于實驗精度的要求，有些科學家不僅只想記錄單個神經元的反應，他們還想更確切地知道神經元上哪些樹突和樹突棘參與了某個行為，也就是說他們需要在huoti條件下，對單根樹突以及某些spine進行鈣成像記錄實驗。由于雙光子熒光顯微鏡和GCaMP6基因編碼鈣離子指示劑的發展，現在，對樹突和樹突棘用鈣成像實驗進行記錄也成為了可能。上海動物神經元鈣成像參考價鈣離子成像可以用于感知覺，學習記憶，社會性行為等各種各樣的研究中。

哺乳動物睡眠的特點是神經元活動發生了戲劇性的變化，覺醒的神經元活動被認為會增加睡眠需求。其他腦細胞(膠質細胞)在自然睡眠-覺醒周期中的變化以及它們在睡眠調節中的作用相對來說還沒有被研究過。華盛頓州立大學ElsonS.Floyd醫學院生物醫學系的MarcosG.Frank研究團隊于2020年9月24日在CurrentBiology上發表論文“ARoleforAstroglialCalciuminMammalianSleepandSleepRegulation”，通過使用滔博生物-Inscopix自由活動鈣成像顯微鏡發現額葉皮層的星形膠質細胞鈣濃度隨睡眠和清醒而變化，會在睡眠剝奪后改變，并調節睡眠需求。

可見光激發Ca2+熒光探針：與紫外光激發探針相比，可見光激發Ca2+探針具有更強的染料吸收性能，對Ca2+變化水平檢測敏感度也更高，能夠降低對活細胞的光毒性和樣品自發熒光以及光散射的干擾，且無光譜偏移。較常使用的可見光激發Ca2+熒光探針有Fluo-3，Fluo-4，Rhod-2等，同時他們也都是非比率型指示劑。Fluo-3是較常用的可見光激發Ca2+熒光指示劑之一，是典型的的單波長指示劑，比較大激發波長為506nm，比較大發射波長為526nm。它與Ca2+結合之前幾乎無熒光，結合后熒光會增加60至100倍，從而避免了細胞自身的熒光干擾。實際檢測時推薦使用的激發波長為488nm左右，發射波長為525～530nm（圖3）。Fluo-3可以用在激光共聚焦顯微成像或流式細胞儀中。它還有一個升級版本Fluo-4，在相同Ca2+濃度下信號更強。鈣成像技術被廣泛應用于同時監測成百上千個神經元內鈣離子的變化。

多種鈣離子指示劑和鈣成像手段的存在使研究人員能夠根據具體的實驗需要進行選擇。同樣，選擇合適的檢測設備也是至關重要的。對于使用CCD/sCMOS相機的成像系統來說，有兩個要求是很基本的：采集速度：根據不同的應用所需的相機幀速也不同，對于神經細胞來說，一般要求相機速度至少在10fps以上，有些高速應用場景可能需要幾百甚至上千Hz的幀速。靈敏度：為了盡可能降低光漂白和其他副作用（特別是藍光激發時），需要降低激發光強度。因此相機要在較寬的發射光波長范圍上具有高靈敏度，才能檢測到弱光條件下的信號，并適應不同的染料的光譜發射特性。鈣成像技術發現鈣離子產生各種各樣的胞內信號。深圳光遺傳鈣成像

鈣離子能產生許多控制細胞功能的胞內信號，如突觸囊泡中神經遞質的釋放等。浙江熒光鈣成像哪里有

解決鈣成像裝置對核磁成像的干擾：考慮到金屬對核磁成像的影響，研究人員在核磁共振成像的模塊上裝上了鈣成像模塊，該成像模塊所有的金屬元件全部被更換為非導電塑料。考慮到磁場對光纖記錄系統的干擾，減少鈣信號的噪音，將相干光纖激光器與核磁共振放置相鄰不同的房間。解決鈣成像和核磁成像區域的一致性：在成像過程中，以皮層區域的血管分布為參照物，以保證鈣成像和核磁成像的區域基本保持一致。但在實際成像中，鈣離子變化和血氧水平依賴性信號所響應的區域并不是完全重合。因此研究人員將響應區域內的信號變化幅度進行均一化，盡量避免因統計閾值引起差異。浙江熒光鈣成像哪里有

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