在新藥研發的過程中,原代肝細胞是不可或缺的體外模型,這是因為肝臟能夠代謝大部分藥物。因此,通過使用原代肝細胞,可以更加準確地模擬藥物在人體內的代謝和毒理反應,為新藥研發提供更加可靠的數據支持。 在藥物代謝實驗中,原代肝細胞可以幫助研究人員了解藥物在體內的代謝途徑、代謝產物以及代謝速率等信息。這些信息對于藥物的研發和臨床應用都具有重要意義。同時,在藥物毒理實驗中,原代肝細胞也能夠幫助研究人員評估藥物的毒性和安全性,為藥物的臨床應用提供保障。 除此之外,原代肝細胞還可以用于藥物靶向誘導實驗。通過對原代肝細胞進行特定的處理,可以使其表達特定的蛋白質或基因,從而實現對藥物靶向的調控。這種方法可以幫助研究人員更好地了解藥物的作用機制,為藥物的研發和應用提供更加可靠的指導。 原代肝細胞在新藥研發中具有不可替代的重要作用。利用原代肝細胞,可以更加準確地模擬藥物在人體內的代謝和毒理反應,為藥物的研發和臨床應用提供更加可靠的數據支持。提高原代肝細胞的活率需要綜合考慮多個因素:細胞培養條件、細胞來源、細胞分離方法、培養基成分等。汕頭中國人原代肝細胞實驗
細胞外基質(ECM)成分可以讓原代肝細胞在培養皿中貼壁效果更好。例如膠原蛋白、基質膠或人纖維鏈接蛋白,這些成分可以模擬細胞在人體內所處的微環境,從而提升細胞的狀態和生長能力。 膠原蛋白是一種重要的細胞外基質成分,它可以提供細胞所需的支撐和結構。在原代肝細胞培養中,加入膠原蛋白可以讓原代肝細胞更好地附著在培養皿上,從而促進原代肝細胞的生長和分化。 基質膠是一種含有多種細胞外基質成分的復合物,它可以提供更加復雜和多樣化的細胞外環境。在原代肝細胞培養中,加入基質膠可以模擬細胞在人體內所處的復雜環境,從而提高細胞的適應性和生長能力。此外,基質膠還可以促進細胞間的相互作用和信號傳遞,從而增強原代肝細胞的功能和穩定性。 人纖維鏈接蛋白是一種重組的細胞外基質成分,它可以提供細胞所需的支撐和結構。 加入細胞外基質成分可以可以模擬細胞在人體內所處的微環境,讓原代肝細胞在培養皿中更好地生長和分化,從而提高細胞的狀態和穩定性。中山雞原代肝細胞提取原代肝細胞冷凍復蘇后若用于懸浮培養,由于失巢凋亡一般壽命是12小時左右,而貼壁肝細胞可以存活達15天。
endotoxin對原代肝細胞的培養有著重要的影響。endotoxin是一種細菌產生的有害物質,它可以對原代肝細胞的培養產生不良影響。在進行原代肝細胞的培養過程中,endotoxin的存在會導致細胞的凋亡、細胞周期的停滯、細胞功能的異常等問題。 endotoxin的存在會引起細胞內炎癥反應,導致細胞的凋亡。endotoxin可以打通細胞內的炎癥信號通路,導致細胞內產生大量的炎癥因子,如腫瘤壞死因子、白細胞介素等。這些炎癥因子會引起細胞的凋亡,從而影響原代肝細胞的培養。 endotoxin的存在還會導致細胞周期的停滯。endotoxin可以抑制細胞周期的進程,使得細胞無法正常分裂和增殖。這會導致細胞的數量無法增加,從而影響原代肝細胞的培養。 endotoxin的存在還會影響細胞的功能。endotoxin可以影響細胞的代謝、分泌和信號傳導等功能,從而影響原代肝細胞的生理和病理過程。這會導致研究人員無法得到準確的實驗結果,從而影響對肝臟生理和病理的研究。 因此,在進行原代肝細胞的培養過程中,需要注意endotoxin的存在。可以采用endotoxin去除劑等方法去除endotoxin,從而保證原代肝細胞的正常生長和功能。
原代肝細胞體外培養一般培養在瓶皿等容器中,根據它們是否能貼附在支持物上生長的特性,可分為懸浮型和貼壁型兩大類。 原代肝細胞懸浮生長時可以呈單個細胞或細小的細胞團,胞體為圓形。其優點是在培養液中生長,生存空間大,允許長時間生長,便于大量繁殖。正常貼壁原代肝細胞具有接觸抑制和密度抑制的雙重特性,細胞相互接觸后可抑制細胞的運動,因此細胞不會相互重疊于其上面生長。細胞生長、匯合成片后,雖發生接觸抑制,但只要營養充分,仍可增殖分裂,但當細胞數量達到一定密度后,由于營養的枯竭和代謝物的影響,細胞分裂停止,稱為密度抑制。 當肝細胞被分離后,可以進行懸浮培養或貼壁培養。懸浮培養的原代肝細胞在開始的4~6h內細胞色素P450酶的活性和體內一致,隨時間的延長而迅速下降,故懸浮肝細胞一般用于代謝穩定性研究或代謝物譜研究。貼壁培養的原代肝細胞有足夠的時間從損傷中恢復過來,保持了正常肝細胞的生物學特征及代謝活性,一般用于酶誘導研究、藥物細胞毒性研究、慢代謝藥物的代謝穩定性或產物推斷研究。立沃生物同一批次的原代肝細胞具有高度的穩定性和可重復性,可以為客戶提供穩定的實驗結果。
原代肝細胞的來源供體來源很多。鑒于人原代肝細胞存在數量稀缺和倫理道德等問題,研究人員嘗試從動物肝臟中分離原代肝細胞,用來體外培養并進行研究。使用較多的是嚙齒動物,還有一些哺乳動物和魚類。目前常用的供體品系有樹鼩、大小鼠、豬、新西蘭兔、比格犬、貓、牛、羊、雞、鴨、鵝、魚等。 原代肝細胞除了供體品系不同以外,也會根據細胞來源的供體數,分為單供體和多供體。供體數的選擇主要取決于實驗的研究目的。 原代肝細胞的應用場景也很多。隨著技術水平的不斷提高,原代培養的動物和人肝細胞已廣泛應用于藥物研究:①探討藥物在肝中的代謝途徑和藥物藥代動力學的研究;②預測和解釋藥物與藥物之間的相互作用;③研究藥物的細胞毒性等。懸浮肝細胞主要應用于藥物代謝研究,一般使用多供體混合懸浮肝細胞,適用于試驗周期比較短的實驗。珠海鮭魚原代肝細胞購買
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貓作也是原代肝細胞的常用供體,近年來在生物醫藥領域的研究中扮演著越來越重要的角色。相對于小鼠和大鼠等試驗用動物,貓的體型更大,便于試驗操作和觀察,因此被廣泛應用于科研、教育和藥物研發等領域。據美國農業部動植物衛生檢疫局(APHIS)的統計數據顯示,在2017年,美國就使用了約萬只貓進行試驗研究。而在中國,試驗用貓的年使用量也在不斷增加,據文獻報道,每年浙江省的藥品質量監測就需要使用400-500只試驗用貓。貓的原代肝細胞和肝微粒體是不可或缺的研究材料。通過對貓的肝細胞進行體外研究,可以更加準確地評估藥物的代謝和毒性,為藥物研發提供重要的參考依據。此外,貓的原代肝細胞還可以用于疾病模型的建立和藥物療效的評估,為ClinicalTreatment提供重要的支持。然而,試驗用貓的使用也引起了一些爭議。一些動物保護組織認為,試驗用貓的使用會對動物造成痛苦和傷害,應該盡量減少或避免使用。因此,科研人員需要在確保研究質量的前提下,盡可能地減少試驗用貓的使用,采用替代方法和技術,以保障動物福利和人類健康。汕頭中國人原代肝細胞實驗