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徐匯區生態即用型培養基服務保障

來源: 發布時間:2020-11-04

    二、培養基培養基有天然、人工兩種。一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養基,以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)調pH至,若pH值超過,則大多數細胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌,使用前需經滅菌μm孔徑濾膜濾過處理。三、血清培養中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高壓滅菌,無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補體,置4℃冰箱存放待用。配制時含量視培養細胞種類、時間而定,一般用10—15%。由于血清成分復雜、條件不易控制,可選用無血清培養基。四、***素為防止培養時期細菌的污染,可在培養基中添加適當***素,一般用量與組織細胞培養相同:卡那霉素100單位/毫升,或雙抗--青霉素100單位/毫升,鏈霉素100微克/毫升。五、植物血凝素(PHA)非增殖期的細胞不能制備染色體,如人外周血淋巴細胞,但在離體培養過程中,在PHA的作用下,可被刺激轉化為淋巴母細胞而進入有絲分裂。經實驗測定其分裂高峰分別于培養后44-48小時和68-72小時。PHA有粘多糖,蛋白質兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂,蛋白質起凝集作用。PHA***的細胞數隨其濃度而增加,直至全部免疫活性細胞均被***為止,但PHA濃度過高會引起凝集,一般采用4%濃度為好。培養基成分的稱取培養基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯亂。徐匯區生態即用型培養基服務保障

    用于培養霉菌的加入蔗糖,用于培養酵母菌的加入葡萄糖),補足水分,分裝,滅菌,備用。把這培養基的pH值調到,配方中的糖,如用葡萄糖還可用來培養放線菌和芽孢桿菌。豆芽汁培養基黃豆芽100g,瓊脂15g,葡萄糖20g,水1000ml洗凈黃豆芽,加水煮沸30分鐘。用紗布過濾,濾液中加入瓊脂,加熱溶解后放入糖,攪拌使它溶解,補足水分到1000ml,分裝,滅菌,備用。把這培養基的pH值調到,可用來培養細菌和放線菌。豌豆瓊脂培養基豌豆80粒,瓊脂5g,水200ml瓊脂取80粒干豌豆加水,煮沸1小時,用紗布過濾后,在濾液中加入瓊脂,煮沸到溶解,分裝,滅菌,備用。食用菌菌種培養基馬鈴薯-蔗糖-瓊脂培養基20%馬鈴薯煮汁1000ml,蔗糖20g,瓊脂18g把馬鈴薯洗凈去皮后,切成小塊。稱取馬鈴薯小塊200g,加水1000ml,煮沸20分鐘后,過濾。在濾汁中補足水分到1000ml,即成20%馬鈴薯煮汁。在馬鈴薯煮汁中加入瓊脂和蔗糖,煮沸,使它溶解后,補足水分,分裝,滅菌,備用。使用該培養基對pH值要求不嚴格,可以不測定。綜合馬鈴薯培養基20%馬鈴薯煮汁1000ml,磷酸二氫鉀3g,硫酸鎂,葡萄糖20g,維生素10mg,瓊脂18g先配制20%馬鈴薯煮汁,方法同上。在煮汁中加入上述各種組分,加熱溶解后補足水分。長寧區現代即用型培養基建筑不要中斷。可將配方置于傍側,每稱完一種成分即在配方上做出記號。

    且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、***、無機物等,這些物質對促進細胞生長或***生長活性是達到生理平衡的。血清主要作用1.提供基本營養物質:氨基酸、維生素、無機物、脂類物質、核酸衍生物等,是細胞生長必須的物質。2.提供***和各種生長因子:胰島素、腎上腺皮質***(氫化可的松、**)、類固醇***(雌二醇、睪酮、孕酮)等。生長因子如成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等。3.提供結合蛋白:結合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質,如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及***等,轉鐵蛋白攜帶鐵。結合蛋白在細胞代謝過程中起重要作用。4.提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷。5.對培養中的細胞起到某些保護作用:有一些細胞,如內皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。這種作用是偶然發現的,則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因為胰蛋白酶已經被***用于貼壁細胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度,可以保護細胞免受機械損傷,特別是在懸浮培養攪拌時,粘度起到重要作用。

    然后在同樣溫度下有光照和全黑暗下培養3周直至愈傷組織形成(兩種情況各置3瓶)。觀察愈傷組織誘導結果,統計愈傷組織誘導率。***分化及植株再生培養將誘導的愈傷組織按類型分別轉入分化培養基上,置于連續光照,溫度20-22℃條件下培養3周,統計愈傷組織再生植株情況。愈傷組織誘導的總體情況***愈傷組織誘導培養4周后,愈傷組織基本形成,即排除因生長時間不夠而未形成愈傷的情況。具體情況見表一中所示。6瓶培養物均有愈傷形成,且都未發生污染,但誘導率幾乎各不相同。其中,在光照條件下培養的3瓶平均愈傷誘導率為,在黑暗條件下培養的3瓶平均愈傷誘導率為。由于實驗過程中,外植體即***葉片取得偏小,接種時可能已有部分外植體的大部分細胞脫水死亡,使整個實驗的愈傷組織誘導率偏低,愈傷塊偏小。動物細胞培養基RPMI1640培養基是一個全營養型培養基,***應用于哺乳動物細胞和雜交瘤細胞的培養,如人骨髓瘤細胞、鼠雜交瘤細胞、人白細胞以及B細胞和T細胞。**初設計用于懸浮細胞培養和人白血病細胞的單層細胞培養。培養基特殊培養基編輯語音選擇性培養基選擇性培養基是指根據某種微生物的特殊營養要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養基。包括培養基名稱,配方及其來源,和各種成份的牌號。

    轉用文火燉2小時。過濾,濾出的肉末干燥處理,濾液pH值調到。每支試管內加入10毫升肉湯和少量碎末狀的干牛心,滅菌,備用。根瘤菌培養基葡萄糖10g,磷酸氫二鉀,碳酸鈣3g,硫酸鎂,酵母粉,水1000ml,1%結晶紫溶液1ml。先把瓊脂加水煮沸溶解,然后分別加入其他組分,攪拌使溶解后,分裝,滅菌,備用。放線菌培養基淀粉硝酸鹽培養基(高氏一號培養基)可溶性淀粉,硝酸鉀,磷酸氫二鉀,氯化鈉,硫酸鎂,硫酸亞鐵,瓊脂2g,水100ml。先把淀粉放在燒杯里,用5ml水調成糊狀后,倒入95ml水,攪勻后加入其他藥品,使它溶解。在燒杯外做好記號,加熱到煮沸時加入瓊脂,不停攪拌,待瓊脂完全溶解后,補足失水。調整pH值到,分裝后滅菌,備用。面粉瓊脂培養基面粉60g,瓊脂20g,水1000ml把面粉用水調成糊狀,加水到500ml,放在文火上煮30分鐘。另取500ml水,放入瓊脂,加熱煮沸到溶解后,把兩液調勻,補充水分,調整pH值到,分裝,滅菌,備用。微藻培養基BG-11培養基NaNO3,K2HPO4·,MgSO4·,CaCl2·CitricAcid(檸檬酸),Ferricammoniumcitrate(檸檬酸鐵銨,EDTA(dinatrium-salt),Na2CO3,A5+Cosolution*(A5溶液1000×)1mlDistilledWater。原記錄保存備查,復制記錄隨制好的培養基一同存放、以防發生混亂。寶山區現代即用型培養基排名靠前

因此,除所用的是標準方法,應嚴格按其規定進行配制外。徐匯區生態即用型培養基服務保障

    如血漿、血清、***、雞胚浸出液等。組織培養技術建立早期,體外培養細胞都是利用天然培養基。但是由于天然培養基制作過程復雜、批間差異大,因此逐漸為合成培養基所替代。***使用的天然培養基是血清,另外各種組織提取液、促進細胞貼壁的膠原類物質在培養某些特殊細胞也是必不可少。血清種類目用于組織培養的血清主要是牛血清,培養某些特殊細胞也用人血清、馬血清等。選擇用牛血清培養細胞的原因:來源充足、制備技術成熟、經過長時間的應用考驗人們對其有比較深入的理解。牛血清對絕大多數哺乳動物細胞都是適合的,但并不排除在培養某種細胞時使用其他動物血清更合適。牛血清是細胞培養中用量**大的天然培養基,含有豐富的細胞生長必須的營養成份,具有極為重要的功能。牛血清分為小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清應取自剖腹產的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質**高的,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分**少。血清樣本血清的主要成分血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚。徐匯區生態即用型培養基服務保障

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