外泌體的提取主要包括以下幾種方式：一是色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設(shè)備，應(yīng)用不普遍。二是微流控分離法，該方法通過(guò)負(fù)壓及震蕩等機(jī)械原理分離外泌體，產(chǎn)量純度均具有較大幅度提高，但需要特定設(shè)備配合。外泌體分離方法之納米粒徑分析法：確定性橫向位移依賴于顆粒流動(dòng)路徑的變化，而顆粒流動(dòng)路徑取決于顆粒尺寸。這種方法雖然比較簡(jiǎn)單，但是需要使用掃描電鏡技術(shù)、動(dòng)態(tài)光散射技術(shù)、納米粒子跟蹤分析技術(shù)、單粒子干涉反射成像傳感器（SP-IRIS）技術(shù)等。對(duì)于外泌體大小、形態(tài)、外泌體的濃度、zeta電位等分析也可以使用粒度分析儀。外泌體與肺的關(guān)系密切，通過(guò)氣道和肺泡微環(huán)境的打開(kāi)和修飾，參與肺疾病如肺結(jié)核、肺病等的發(fā)生和發(fā)展。濰坊組織提取外泌體

外泌體分離方法之尺寸排阻層析法：尺寸排阻層析法也被稱為凝膠過(guò)濾層析法，這種方法是基于凝膠孔的大小和外泌體的大小，大于凝膠孔徑的顆粒被洗脫；反之，小于凝膠孔徑的顆粒將被抑制。凝膠過(guò)濾層析分離法總體上能獲得較高的純度和產(chǎn)量。建議與超濾相結(jié)合，這種方法可提供更少的蛋白質(zhì)污染和更高的外泌體回收率。凝膠過(guò)濾層析分離法的缺點(diǎn)是凝膠的成本過(guò)高。外泌體分離方法之聲學(xué)流體分離：聲學(xué)流體分離技術(shù)利用聲場(chǎng)根據(jù)粒子的大小、密度和可壓縮性來(lái)分離粒子。生物樣品在此過(guò)程中不會(huì)受到損壞，并且分離的本身是非接觸式、高效的和無(wú)標(biāo)記的。佛山血漿外泌體穩(wěn)定性好外泌體攜帶的小分子物質(zhì)（如ATP、GTP等）參與細(xì)胞生命活動(dòng)、代謝、細(xì)胞生長(zhǎng)和分化等生物學(xué)進(jìn)程。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法，這是外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒(méi)有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過(guò)濾離心，這種操作簡(jiǎn)單、省時(shí)，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問(wèn)題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜，耗時(shí)，量少。

差速離心法分離外泌體的實(shí)驗(yàn)原理：外泌體是一種小的(40-100nm)細(xì)胞外膜囊泡，目前進(jìn)行外泌體分離的普遍方法是差速離心法。應(yīng)用差速離心法和粒徑分析等是細(xì)胞外囊泡(EV)研究的重要步驟。已知細(xì)胞會(huì)分泌許多膜囊泡，這些囊泡的大小、分子含量及其形成機(jī)制各不相同具體取決于細(xì)胞的類型和當(dāng)前狀態(tài)。通常可以辨別出三個(gè)主要的EV群體：凋亡小體、脫落的囊泡和外泌體.凋亡小體是已知較大的囊泡，直徑為800-5000nm，由凋亡后細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和質(zhì)膜成分組成。脫落的囊泡和外泌體由非凋亡細(xì)胞釋放。脫落的囊泡，也稱為“胞外體”或有時(shí)稱為“微泡”，是由質(zhì)膜起泡產(chǎn)生的，一般的粒徑尺寸范圍為(50–1000nm)。外泌體與細(xì)胞死亡形式相關(guān)，可以參與凋亡和壞死細(xì)胞的清理和處理過(guò)程。

外泌體的構(gòu)成：外泌體富含膽固醇和鞘磷脂。2007年，Valadi等發(fā)現(xiàn)鼠的肥大細(xì)胞分泌的exosome可以被人的肥大細(xì)胞捕獲，并且其攜帶的mRNA成分可以進(jìn)入細(xì)胞漿中可以被翻譯成蛋白質(zhì)，不只是mRNA，exosomes所轉(zhuǎn)移的microRNA同樣具有生物活性，在進(jìn)入靶細(xì)胞后可以靶向調(diào)節(jié)細(xì)胞中mRNA的水平。這一發(fā)現(xiàn)使得研究人員對(duì)exosome的研究熱情激增，截止已經(jīng)通過(guò)286項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)了41860種蛋白質(zhì)、2838種microRNA、3408種mRNA。一類外泌體中常見(jiàn)的細(xì)胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白，是鳥(niǎo)苷酸三磷酸酶家族的一種。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細(xì)胞的融合，有文獻(xiàn)報(bào)道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)于早期以及回收的核內(nèi)體中，RAB7和RAB9主要出現(xiàn)于晚期的核內(nèi)體。現(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。優(yōu)化外泌體分離方法可以提高分離效率和分離精度。濰坊組織提取外泌體

外泌體可以通過(guò)非典型途徑進(jìn)行排毒，參與細(xì)胞解掉毒和化學(xué)治著的作用。濰坊組織提取外泌體

外泌體的表征方法之非光學(xué)方法：非光學(xué)方法主要包括掃描電子顯微鏡（SEM）、透射電子顯微鏡（TEM）、冷凍電子顯微鏡（Cryo-EM）、原子力顯微鏡（AFM）、免疫檢測(cè)方法（ELISA）、傅立葉變換紅外光譜（FTIR）、可調(diào)諧電阻脈沖傳感(TRPS)和單粒子干涉反射成像傳感器(SP-IRIS)。SEM、TEM和AFM方法通常用于直接膜結(jié)構(gòu)和形態(tài)測(cè)定，而ELISA檢測(cè)提供各種結(jié)構(gòu)顆粒（主要是蛋白質(zhì)和受體）的檢測(cè)和量化，例如，用于外泌體形態(tài)的確認(rèn)。單粒子干涉反射成像傳感器(SP-IRIS)也用于外泌體定量，但也可用于檢測(cè)特定標(biāo)記物和確定外泌體亞群。濰坊組織提取外泌體

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