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武漢外泌體分離費用

來源: 發布時間:2023-11-22

外泌體的構成:除了RAB蛋白,外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯蛋白(包括膜聯蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。外泌體膜上富含參與外泌體運輸的四跨膜蛋白家族(CD63,CD81和CD9)、熱休克蛋白家族((HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細胞特異性的蛋白包括A33(結腸上皮細胞來源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源)、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素(不成熟的樹突狀細胞)。其它一些外泌體中的蛋白包括多種的代謝類的酶(烯醇化酶1,醛縮酶1,PKM2,PGK1,PDIA3,GSTP1,DPP4,AHCY,TPL1,抗氧化蛋白,P4HB,LDH,親環素A,FASN,MDH1和CNP)、核糖體蛋白(RPS3)、信號轉導因子(黑色素瘤分化相關因子,ARF1,CDC42,人類紅細胞膜整合蛋白,SLC9A3R1)、粘附因子(MFGE8、整合素)、細胞骨架蛋白以及泛素等。外泌體通過它們攜帶的間質基質組分,在宿主細胞中誘導上皮間質轉化等重要的生物學反應。武漢外泌體分離費用

分離外泌體的方法之密度梯度超速離心:有助于根據尺寸、結構和形態差異分離和分析納米級材料。DGUC“細化”分離的囊泡,并使用密度為1.07g/mL或更低的密度梯度培養基。水中碘沙醇、冰冷的PBS和蔗糖是用于外泌體分離的常見梯度培養基。有市售的碘沙醇密度梯度分餾膜,用于將外泌體與非囊泡成分分離。將生物懸浮液添加到梯度培養基中,并以完整的梯度分層組分。DGUC有助于分離具有相同梯度的樣品。凋亡小體、蛋白質聚集體和其他非外泌體微囊泡可能通過超速離心干擾較終分離的外泌體產物。DGUC有助于克服超速離心的局限性,并提供較純凈的外泌體。DGUC在精細化和高性能外泌體分離方法中的應用。簡而言之,在分離細胞碎片后,應用1×105g用60%碘沙醇離心3小時,然后用1×10離心5用40%碘沙醇g18小時有助于形成多達12個碘沙醇梯度級分和兩個外泌體級分。超速離心使用連續的密度梯度或逐步梯度來較小化這些顆粒材料對外泌體的干擾。上清外泌體分離供貨商外泌體可作為一種疙瘩標志物進行檢測,通過其生物學特征進行診斷和治著。

外泌體的構成:外泌體富含膽固醇和鞘磷脂。2007年,Valadi等發現鼠的肥大細胞分泌的exosome可以被人的肥大細胞捕獲,并且其攜帶的mRNA成分可以進入細胞漿中可以被翻譯成蛋白質,不只是mRNA,exosomes所轉移的microRNA同樣具有生物活性,在進入靶細胞后可以靶向調節細胞中mRNA的水平。這一發現使得研究人員對exosome的研究熱情激增,截止已經通過286項研究發現了41860種蛋白質、2838種microRNA、3408種mRNA。一類外泌體中常見的細胞質蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。它可以調節外泌體膜與受體細胞的融合,有文獻報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現于早期以及回收的核內體中,RAB7和RAB9主要出現于晚期的核內體。現有大量的研究發現外泌體中含有40種RAB蛋白。

外泌體的表征分析:Zeta電位:通過電泳光散射(ELS)測量的Zeta電位測量粒子在電泳場中的速度。Zeta電位是膠體分散體穩定性的指標(非常值)和囊泡表面電荷的量度(+或-符號)。電子顯微鏡分析:對于電子顯微鏡分析,外泌體制劑在PBS緩沖液中按1:10稀釋,隨后在等體積的4%(w/v)多聚甲醛和1%(v/v)戊二醛中固定5分鐘。然后將樣品置于formvar-carbon涂層的600目銅網格上,并在室溫下干燥5分鐘。隨后將樣品在乙酸雙氧鈾溶液(2%水溶液)中進行對比,并在電子顯微鏡(Jeol1230TEM)下觀察,加速電壓為80kV,并連接到數碼相機進行觀察。外泌體被發現在各種生物體中,包括哺乳動物、植物和微生物。

外泌體的表征方法:根據藥物遞送系統(DDS)表征外泌體結構至關重要,因為它決定了DDS的特性,例如細胞或組織親和力、應激反應、吸收途徑和藥物釋放。2014年和2018年國際細胞外囊泡學會(MISEV2018)提出了外泌體(包括研究和外泌體制備)應滿足的基本要求指南。在開發基于外泌體的DDS時,必須考慮數量、大小、形態、膜組成和蛋白質(包括受體)等參數。這些參數表征所用的技術主要為光學、非光學和微流體技術。外泌體的表征方法之非光學方法:FTIR光譜和衰減全反射FTIR(ATR-FTIR)常用于外泌體質量量化和脂質和蛋白質含量的總體估計。使用TRPS,可以同時測量大小、濃度和zeta電位。由于掃描電子顯微鏡(SEM)、透射電子顯微鏡的成本較高,近些年來,一種新型的納米粒度分析儀器在外泌體研究領域迅速發展,比如:粒度分析儀可以不只可以進行單顆粒檢測,顆粒粒徑檢測還可以檢測細胞外泌體的濃度、zeta電位、形態等進行多維度檢測。部分外泌體分離方法可能存在對外泌體結構和元素的影響。武漢外泌體分離費用

外泌體在很多生理和病理情況下都發揮著不可或缺的作用。武漢外泌體分離費用

分離外泌體的方法之超濾:樣品通過0.2μm聚醚砜(PES)膜過濾,較大的顆粒物質(如細胞碎片和凋亡體)被滯留出來。然后,包括外泌體在內的半處理濾液樣品通過TFF系統通過500kDa截止濾芯進行超濾過程,進料流速為120mL/min,跨膜壓力<3.5psi跨膜壓力>10:1,外泌體太大而無法通過毛孔并保持保留。相反,包括游離蛋白在內的小分子通過中空纖維孔并作為滲透物洗脫并較終從過程中丟棄。為了獲得高質量的外泌體分離和純化,通過TFF連續重新濃縮截留物樣品,并去除小于500kDa的污染物。較后,將純化的外泌體重懸并儲存在-80°C的聚對苯二甲酸乙二醇(PETG)瓶中的0.1M蔗糖中,并用于所需的分析。通常,通過結合超濾加超速離心或離心加超濾等不同分離方法可以成功分離外泌體,使用較低孔徑的膜過濾和超速離心可提供純外泌體。武漢外泌體分離費用

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