支原體是實驗室中常見的污染細胞的原核生物,據統計約有15%-35%的細胞被支原體污染。支原體會改變宿主細胞的結構和功能等一系列特征,造成實驗結果不正確;干擾細胞代謝和生長,改變核酸合成,影響細胞抗原性,導致染色體改變,干擾病毒復制以及模仿病毒的作用。因此,每一株外來細胞在進入實驗室之前,都應進行支原體檢測,并且應對培養中的細胞定期(如每2-3個月)進行支原體檢測。建立定期的監控方案,有助于提高科研效率,在污染發生在早期時及時處理。可避免支原體污染造成更大的損失!NAT支原體檢測法哪家產品好。蘇州快速支原體檢測優點
用qPCR法進行支原體檢測時,出現擴增曲線末尾起跳的原因可能是什么?①陰性質控或無模板對照曲線末尾出現起跳情況,考慮環境存在污染所致,建議對實驗環境做好控制,如使用低吸附帶濾芯搶頭和低吸附ep管,保證實驗分區(樣品處理區、試劑保存及配制區、PCR擴增區)、用DNA清除劑處理環境等。②待測樣品曲線末尾出現起跳情況,在確保陰性質控或無模板對結果正常的情況下,可以進行復測,復測結果一致,則考慮是樣品中待測物濃度較低所致。南京便捷支原體檢測方法學支原體檢測方法有哪些。
qPCR法支原體檢測試劑盒的操作流程包括支原體DNA提取、qPCR試劑配制、qPCR加樣及上機檢測、結果分析四個環節。支原體DNA提取包含樣品前處理(離心分離上清等)、樣品裂解液消化、支原體DNA與磁珠結合、一次洗滌、二次洗滌、洗脫;qPCR試劑在配制時需先將試劑放置于室溫,避光放置30min,直至試劑融化,各個試劑組分混勻后按照說明書進行配制并分裝。在實驗室,注意分區操作,降低實驗發生污染的風險。用qPCR法進行支原體檢測時,出現擴增曲線異常的可能原因是什么?①如出現非特異性擴增現象,該問題是由反應管未蓋緊或密閉性差引起溶液蒸發而造成。上機前確保管蓋密閉,反應結束后查看八聯管或96孔板各管液面是否一致。與設備硬件相關,需咨詢硬件供應商解決。②如出現擴增曲線不平滑現象:可能與ROX加入量不足相關,個別設備有ROX校正功能,不同型號設備對ROX的需求量會有差異,需設置實驗摸索合適的ROX加入量。
細胞培養時做支原體檢測是至關重要的。支原體在自然界分布普遍,無細胞壁,直徑為0.1-0.3μm,且形態易變,極易通過除菌過濾器。細胞培養被支原體污染是極普遍的問題,在細胞培養過程中如果在顯微鏡下發現破碎的細胞很多,需要頻繁換液才能維持傳代培養的時候,即應懷疑支原體污染。面對支原體污染給細胞培養帶來的巨大難題,世界各國開始重視,并相繼建立了細胞庫,對細胞質量進展控制,效果明顯,支原體污染的問題得以限制。目前已知能污染細胞的支原體有20多種以上。細胞培養過程中遇到的支原體95%都來自于以下四種支原體:口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、萊氏無膽甾支原體,其中萊氏無膽甾支原體為牛源性。CAR-T相關支原體檢測要求有哪些?
qPCR法支原體檢測程序中,陰性對照(NCS)和空白對照(BLK)的區別:陰性對照(NCS):為樣品稀釋液經核酸提取純化后所得,在提取純化前同待測樣品一樣需加入IC,NCS用于監測提取環節是否存在紕漏,比如:操作問題、試劑性能異常、提取環節出現污染等情況;空白對照(BLK):在PCR檢測環節加入的對照品,BLK為純水,不含IC/支原體核酸;BLK用于監測檢測環節是否出現污染,如:檢測試劑盒污染、試劑配制間的環境污染等;南京正揚生物科技有限公司自主研發生產的支原體檢測試劑盒利用Taqman熒光探針原理,定性檢測樣品中是否有支原體污染。本試劑盒涵蓋100多種支原體DNA序列,檢測快速,專一性強,靈敏度高,性能可靠,且能提供國際第三方檢測機構出具的性能驗證報告,符合中、日、美國家的藥典要求。本公司還提供多樣化提取試劑盒,支持手工、自動化提取,自動化提取試劑盒又包括預分裝和非預分裝規格,客戶可根據實際情況進行訂購。傳統的支原體檢測方法。qPCR法支原體檢測優點
支原體檢測對實驗室要求有哪些?蘇州快速支原體檢測優點
南京正揚生物科技有限公司自主研發生產的支原體檢測試劑盒在PCR試劑配制及加樣上機環節有哪些注意事項?①實驗時應注意防止外源DNA對試劑的污染,先加樣品DNA,然后進行陽性質控品的操作。在制備反應試劑和添加DNA模板時,使用帶濾芯的搶頭,添加不同的試劑和不同的樣本時需更換搶頭,并經常更換手套;②PCR實驗室應具有3個不同的分區,分別為試劑準備間、樣本制備間、擴增間。3個分區應存在壓力差,試劑準備間>樣本制備間>擴增間;蘇州快速支原體檢測優點