對于含包膜的病毒載體,如慢病毒LV、逆轉錄病毒RV等,在細胞培養上清液中收獲。而M-SAN HQ中鹽核酸酶,作為市場上更適合生理鹽條件的核酸酶,所以,M-SAN HQ成了包膜病毒載體生產的更好選擇。優勢在于:1. M-SAN HQ兼容多種細胞培養體系,在細胞培養鹽濃度條件下具有更優活性;2. M-SAN HQ酶活更高、酶切速度更快,縮短孵育時間;3. M-SAN HQ能夠高效剪切染色質到更小片段,簡化下游工藝流程;4. 相比Benzonase,M-SAN HQ用量減少1/2-2/3,降低了酶用量及生產成本。廣州中鹽核酸酶價格哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。湖州70950-202中鹽核酸酶聯系方式
文章作者對酶法去除dsDNA進行了優化研究,兩種酶濃度梯度為25U/ml、50U/ml及100U/ml,Mg2+濃度為5mM,通過PicoGreen檢測dsDNA含量。結果發現,25U/ml的M-SAN HQ中鹽核酸酶對dsDNA去除效果明顯優于100U/ml的Benzonase。此外,在酶切反應速度方面,M-SAN HQ有更明顯的優勢,——在低濃度底物dsDNA(如20ng/ml)條件下,50U/ml的M-SAN HQ在5分鐘內將dsDNA降解到2ng/ml左右;而50U/ml的Benzonase在30分鐘孵育消化后,dsDNA濃度依然是12ng/ml左右。合肥M-SAN HQ中鹽核酸酶采購US FDA指南要求:重組biologics終產品中,核酸雜質含量低于10ng/dose。
Medium-Salt Active Nuclease High Quality (M-SAN HQ,中鹽核酸酶),是用Pichia pastoris表達的重組非特異內切核酸酶,廣泛應用于生產工藝流程中,在生理鹽條件下去除雙鏈及單鏈的DNA及RNA。這款核酸酶的適宜pH范圍很廣(pH 7.2-8.7),且在125-250 mM鹽濃度內具有適宜活性。在細胞培養液或收獲的培養上清中,不需調整任何組分,直接加入M-SAN HQ即可表現高核酸酶活性。相比傳統的全能核酸酶,M-SAN HQ中鹽核酸酶在生理鹽條件下,對HCD的去除更高效、更徹底。因此,M-SAN HQ中鹽核酸酶非常適合部分病毒載體(如慢病毒、逆轉錄病毒及溶瘤病毒等)的生產。
在不同的鹽濃度條件下,AAV病毒載體的存在形式不同。低鹽濃度條件下,AAV病毒顆粒表面會通過電荷作用等非特異結合到HCD上,從而產生病毒顆粒團聚現象。隨著溶液鹽濃度上升,AAV病毒顆粒與HCD的離子相互作用會被破壞,AAV病毒顆粒會逐漸解離。當鹽濃度升到更高范圍(>400mM左右),AAV病毒顆粒與HCD的結合更弱,AAV顆粒更穩定。因此,在高鹽濃度溶液中,AAV顆粒更加穩定,且有數據表明高鹽濃度不會削弱AAV的侵染能力。所以,我們推薦提高AAV病毒生產中的鹽濃度。無錫中鹽核酸酶售后服務哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。
跟其他類型的核酸酶一樣,SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶的滅活方法有很多,分為可逆滅活及不可逆滅活。金屬離子螯合劑如EDTA會可逆抑制兩者的活性,加入的EDTA濃度一般是溶液中Mg2+濃度的2倍左右即可完全抑制活性;后續補加過量的Mg2+即可恢復核酸酶活性。加熱、還原劑(如DTT)、咪唑、甘油及表面活性劑(如高于15%濃度的Triton X-100、SDS、尿素等)等都可以使其不可逆失活。在生物工藝流程,需要結合上下游應用需要選擇合適的方法去除或滅活核酸酶。M-SAN HQ ELISA kit檢測產品操作簡單,1.5–2hr即可完成檢測。揚州70960-001中鹽核酸酶供應商
M-SAN HQ中鹽核酸酶更適合細胞基因drug(如AAV、LVV、RV及OV等)的生產。湖州70950-202中鹽核酸酶聯系方式
核酸酶活性受到很多因素影響,如鹽濃度、pH、底物、溫度等。因此,不同客戶、不同項目中核酸酶的使用條件都不一。目前,生物制藥行業對Benonase全能核酸酶的使用比較熟悉,如生理鹽或低鹽濃度、脫鹽操作等。對于大部分使用Benzonase的項目,使用M-SAN HQ中鹽核酸酶可以完全替代,而且溫度、Mg2+濃度等條件不用做任何調整,同樣酶量的M-SAN HQ對宿主細胞DNA(HCD)的去除效果更好、病毒載體得率更高。經過工藝優化后,可以將M-SAN HQ中鹽核酸酶的用量減少到原來的1/3-1/2,且HCD去除效果及產品得率更高。湖州70950-202中鹽核酸酶聯系方式