免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是一種在生物藥物領域廣泛應用的技術，主要用于研究蛋白質之間的相互作用。該技術通過利用特異性抗體將目標蛋白與其相互作用的蛋白一同沉淀下來，從而揭示蛋白質間的相互作用關系。在蛋白泛素化研究方面，Co-IP技術也發揮著重要作用。通過該技術，研究人員可以鑒定并驗證與泛素連接酶和泛素受體相互作用的蛋白質，進一步揭示泛素化修飾的調控機制。同時，結合質譜分析，Co-IP技術還可以鑒定泛素化修飾的靶標蛋白質及其相互作用蛋白質，揭示泛素化修飾在細胞信號傳導、代謝調控等生命過程中的功能和調控網絡。Co-IP（免疫共沉淀）技術應用場景。廣西蛋白蛋白互作檢測CoIP-MS檢測
CoIP實驗免疫沉淀方法如下：
將25μL(0.25mg)的Pierce蛋白A/G的磁珠加入1.5mL離心管中。
向磁珠中加入175μL免疫沉淀裂解/漂洗緩沖液，輕微渦旋混勻。
將離心管放入磁力架中收集磁珠到離心管的一邊。去除上清。
向離心管中加入1mL免疫沉淀裂解/漂洗緩沖液。顛倒離心管數次或輕微渦旋混勻1min。用磁力架收集磁珠。去除上清。
將抗原樣品/抗體混合物加入盛有磁珠的離心管中，保持混勻室溫下孵育1h。
用磁力架收集磁珠，除去未結合的樣品，保存以備分析。
向離心管中加入500μL免疫沉淀裂解/漂洗緩沖液，輕柔混勻。收集磁珠，棄上清。再重復洗兩次。
向管中加入500μL超純水，輕柔混勻。用磁力架收集磁珠，棄上清。
低pH洗脫：向離心管中加入100μL洗脫液。保持混勻在室溫下孵育離心管10min。通過磁力分離磁珠，保留含有目的抗原的上清。每100μL洗出液中加入10μL中和液來中和低pH。備選洗脫方法：向離心管中加入100μL1X電泳上樣緩沖液，將樣品置于加熱器中，96-100℃加熱10min。通過磁力架分離磁珠，保留含有目的抗原的上清。
廣州基云生物，在IP互作組檢測和關鍵機制分子篩選驗證領域，具有豐富的經驗，助力您的互作機制研究。 廣西蛋白蛋白互作檢測CoIP-MS檢測CoIP實驗內源檢測與外源檢測的優缺點。
Co-IP（免疫共沉淀）和ChIP（染色質免疫沉淀）是兩種常用于研究蛋白質與DNA或蛋白質與蛋白質相互作用的實驗方法。實驗原理方面的區別：Co-IP利用抗體與抗原之間的特異性結合，將目標蛋白及其與之相互作用的蛋白一起拉下來，進而研究它們之間的相互作用。而ChIP則是在活細胞狀態下固定蛋白質-DNA復合物，并通過超聲或酶處理將其隨機切斷為一定長度范圍內的染色質小片段，然后通過抗原抗體的特異性識別反應沉淀此復合體，特異性地富集目的蛋白結合的DNA片段。
Co-IP技術作為研究蛋白質相互作用的重要手段，其結果在多數情況下是可靠的。然而，該技術也存在一些潛在的限制和影響因素，需要研究人員予以注意。在實際應用中，由于細胞內蛋白質種類繁多且相互作用復雜，可能會出現非特異性結合或背景噪聲，這要求研究者選擇特異性強的抗體，并通過洗滌步驟去除雜質。此外，樣品的純度、抗體的質量和實驗條件等也會對結果產生影響，因此，對抗體的選擇和驗證、樣品的準備以及實驗條件的控制都至關重要。為了進一步提高結果的準確性，研究人員通常會結合多種方法進行相互驗證，如使用不同抗體或實驗條件重復實驗，或結合質譜技術來驗證Co-IP的結果。這些措施共同增強了Co-IP技術結果的可靠性。免疫共沉淀強大但局限，需謹慎分析數據，避免冒險性。
CoIP-Mass是一種檢測細胞內蛋白互作組的套餐技術。該技術通過聯合免疫共沉淀技術和質譜檢測技術，對目的蛋白在特定細胞/組織內的互作蛋白，進行系統的檢測和分析。該技術適用于目的蛋白在特定細胞/組織中的蛋白互作組數據檢測，或用于不同遺傳背景/實驗條件下的互作組差異研究。因此，該技術是研究細胞內蛋白互作調控網絡的常規前置技術。CoIP-WB是一種檢測細胞內蛋白互作的驗證技術。該技術通過聯合免疫共沉淀技術和WesternBlot蛋白檢測技術，對目的蛋白在特定細胞/組織內的互作關系進行探究，明確蛋白直接的相互作用關系。該技術適用于目的蛋白在特定細胞/組織中的蛋白互作檢測驗證，或用于不同遺傳背景/實驗條件下的互作差異研究。因此，該技術是研究細胞內蛋白互作調控網絡的常規檢測技術。在CoIP（免疫共沉淀）實驗對照組的設計。山西免疫沉淀CoIP-mass spectrometry檢測
Co-IP實驗要點：溫和裂解、驗證抗體、充分結合、沉降分離、洗脫純化，確保結果準確可靠！廣西蛋白蛋白互作檢測CoIP-MS檢測
結合了抗體的磁珠或樹脂（Beads）與樣本裂解液孵育，通過”抗原-抗體“之間的免疫作用，誘餌蛋白被吸附在Beads上，與此同時，誘餌蛋白的互作蛋白，也一起“共沉淀”到Beads上。洗滌去掉未結合的蛋白后，再用洗脫緩沖液將互作蛋白復合物從Beads上洗脫下來，得到免疫共沉淀（Co-IP）產物。Co-IP產物既可以用WesternBlot檢測已知蛋白，也可以用質譜鑒定未知蛋白。當沒有合適的誘餌蛋白抗體時，還可以通過表達融合了Flag標簽的誘餌蛋白，利用Flag標簽抗體做免疫沉淀。即樣本過表達Flag-Bait，經裂解后與anti-Flag珠子孵育，誘餌融合蛋白與Beads結合，其互作蛋白“共沉淀”到Beads上，再經洗滌、洗脫后，用WB或質譜檢測。廣西蛋白蛋白互作檢測CoIP-MS檢測