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來源: 發布時間:2021-10-17

試劑篇:四、根據配體特異性的分離方法-親和色譜法親和層析法(aflinity chromatography)是分離蛋白質的一種極為有效的方法,它經常只需經過一步處理即可使某種待提純的蛋白質從很復雜的蛋白質混合物中分離出來,而且純度很高。這種方法是根據某些蛋白質與另一種稱為配體(Ligand)的分子能特異而非共價地結合。其基本原理:蛋白質在組織或細胞中是以復雜的混合物形式存在,每種類型的細胞都含有上千種不同的蛋白質,因此蛋白質的分離(Separation),提純(Purification)和鑒定(Characterization)是生物化學中的重要的一部分,至今還沒的單獨或一**成的方法能移把任何一種蛋白質從復雜的混合蛋白質中提取出來,因此往往采取幾種方法聯合使用。一步純化檢測原核,酵母或哺乳性動物細胞表達的標簽蛋白。湖北多肽試劑銷售價格

rProteinA/GBeads4FF是將rProteinA/G高密度定向偶聯到高度交聯的瓊脂糖凝膠微球表面,該產品具有更高的抗體結合能力和較低的蛋白非特異吸附率,洗脫條件更均一,一步純化即可從血清樣品中分離出純度大于90%的抗體。產品性能見表1。本產品主要用于免疫沉淀(IP)以及免疫共沉淀(Co-IP)研究,也可用于抗體固定及其它相關研究。用戶可根據目標抗體的種屬來源及亞型選擇微球的類別,純化流程本產品主要應用于免疫沉淀(IP)以及免疫共沉淀(Co-IP)研究。2.1緩沖液的準備所用水和緩沖液在使用之前建議用0.22μm或0.45μm濾膜過濾。平衡/洗雜液:0.15MNaCl,20mMNa2HPO4,pH7.0洗脫液:0.1M甘氨酸,pH3.0中和液:1MTris-HCl,pH8.5交聯液:0.2M三乙醇胺,pH8.2交聯劑:DMP(dimetylpimelimidatedihydrochloride)終止液:50mMTris,pH7.5江西定制試劑純化流程純化糖蛋白,膜蛋白,糖脂,多糖,脂蛋白等。

蛋白純化試劑 IMAC Beads 6FF是以高度交聯的6%瓊脂糖凝膠為基質,配體結構見圖1所示,填料可以用于螯合各種金屬離子,如Cu2+, Zn2+, Ni2+,Co2+, 對His標簽的結合能力Cu2+>Zn2+>Ni2+ >Co2+,可根據金屬離子對標簽蛋白的結合力來選擇需要螯合的金屬離子。具體性能見表1。IMAC Beads 6FF除了可以耐受苛刻的試劑條件(見表2)外,因其耐壓的基質,可以耐受比較高0.3 MPa的壓力,更穩定,因此該產品更適合用于工業大規模蛋白的純化,可以在相對較高的流速下,實現對目的蛋白的純化。

蛋白純化試劑Ni Smart Beads純化流程2/3常州天地人和生物科技有限公司平衡液:20mM磷酸鹽,0.5MNaCl,pH7.4洗雜液:20mM磷酸鹽,0.5MNaCl,0-5mM咪唑,pH7.4洗脫液:20mM磷酸鹽,0.5MNaCl,250mM咪唑,pH7.4注:為了減少宿主細胞蛋白的洗脫,建議在洗雜液中加入低濃度的咪唑。為了消除一些離子作用蛋白的吸附,可以在溶液中加入0.5M-1.0MNaCl。可以采用低pH值洗脫或與咪唑結合,如pH2.5-5.0。2.2樣品準備1)將細胞培養液轉移至離心杯,7,000rpm(7,500×g),離心15min取上清。如果使用預裝柱,樣品在使用前比較好用0.22μm或者0.45μm濾膜過濾除菌。2)樣品中含有可耐受范圍內試劑,不需要透析或濃縮,可以直接上樣。2.3樣品純化流程1)將NiSmartBeads裝入合適的層析柱,層析用5倍柱體積的平衡液進行平衡,使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下,起到保護蛋白的作用。2)將樣品加到平衡好的NiSmartBeads中,保證目的蛋白與Ni2+充分接觸,提高目的蛋白的回收率,收集流出液。3)用10-15倍柱體積的洗雜液進行清洗,去除非特異性吸附的雜蛋白,收集洗雜液。4)使用5-10倍柱體積的洗脫液,收集洗脫液,即目的蛋白組分。瓊脂糖微球的試劑哪家好?

蛋白純化試劑抗體純化rProtein A/G Beads 4FF純化流程,樣品準備上柱之前要確保樣品溶液有合適的離子強度和pH值,可以用平衡/洗雜液對血清樣品、腹水或細胞培養液稀釋,或者樣品用平衡/洗雜液透析。對于100mm培養皿中的貼壁細胞,吸除細胞培養液,使用預冷PBS洗滌一次后加入2ml細胞裂解液裂解細胞。對于懸浮細胞,離心收集細胞后,PBS洗滌一次后參考貼壁細胞的裂解方法進行裂解。植物或動物組織樣品可以使用液氮研磨方法裂解。具體的裂解方法請參考不同裂解液的使用說明,裂解液**終總蛋白濃度選擇在0.5-1μg/μl范圍內較為合適。通常針對目標蛋白的表達量不同,需要對總蛋白濃度進行預實驗調整。2.3.去除非特異性結合(可省略)1)取200微升至1毫升蛋白樣品,加入約1微克和免疫沉淀時使用的IgG種屬相同的3/5常州天地人和生物科技有限公司NormalIgG和20微升充分重懸的rProteinA/GBeads4FF,4℃緩慢搖動30分鐘。2)2500rpm(約1000g)離心1分鐘,取上清用于后續的免疫沉淀。注:哺乳動物細胞內有多種成分可以和IgG發生結合,可能會在后續免疫印跡中出現非特異性條帶。使用normalIgG和rProteinA/GBeads4FF對裂解液預處理可以降低非特異性吸附。帶正電荷的強陽離子交換介質。福建抗體純化試劑純化流程

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