染色免疫組化可以輔助病理診斷、指導、評估預后，所以在做免疫組化過程中的質控問題處理尤其重要［1］。隨著免疫組化試劑新種類不斷出現及方法的改進，特別是即用型試劑盒的出現，使抗體的標記更加簡便、快捷，更加規范化。免疫組化標準化染色技術是一項實驗性很強的技術，任何一個環節出現問題，都可以直接影響免疫組化結果，

【摘要】目的研究CEA免疫組化染色在檢測系膜微轉移及環周切緣(CRM)侵犯方面的價值。方法選取經纖維結腸鏡及病理證實為直腸*病人40例，應用大組織切片技術對術后標本處理，分別行常規染色及CEA免疫組化染色，比較分析兩種染色方法在檢測系膜微轉移及CRM侵犯方面的價值。結果CEA染色檢測**浸潤程度大于常規病理染色，差異有性（t=5.2**<0.001）

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目的 探討不同規格組織芯片在乳腺相關基因產物檢測中的應用價值。方法 采用微波修復免疫組織化學S-P法和組織芯片技術，檢測ER、PR、nm23、Her-2、p53在31例乳腺組織中的表達，并與常規病理學方法進行比較分析。結果 不同規格組織芯相比較，免疫組化結果幾乎完全一致。常規制片免疫組化陰性，而組織芯片免疫組化陽性者包括ER2例，PR1例;常規制片免疫組化陽性，而組織芯片免疫組化陰性者包括nm23、Her-2各1例。部分病例常規制片免疫組化和組織芯片免疫組化陽性表達強度略有不同。結論 組織芯片的免疫組化結果與常規制片免疫組化比較，經統計學處理，差異無顯現性（P>0.05）。組織芯片技術有良好應用價值和廣闊發展前景。黑龍江熒光免疫組化服務免疫組化服務優 周期短，效率高。

冰凍切片是借助低溫冷凍將活檢組織快速凍結達到一定的硬度進行制片的一種方法，手術中等待冰凍快速病理報告，以病變性質而決定手術方式和范圍。而及時、準確的發出報告需要高質量的冰凍切片，鑒于冰凍切片常出現染色模糊不清的現象，對病理判斷造成困難，甚至造成誤診或漏診，實踐中我們發現和組織固定、染色時返藍有一定關系，為了提高冰凍制片質量，我們將FAA、Bouin氏液、88酒精三種固定液作了比較，并在染色中加用促藍液，認為用88酒精固定液及染色時加用促藍液制作的冰凍切片質量較理想，

    —20℃）凍存——應選較佳稀度凍存。③若工作濃度大于1∶500則要先將原液稀釋十倍，而后分裝10μl/瓶→凍存（-20℃）于冰箱備用。④關于Ab保存應參照說明書。（3）Ab濃度的選擇Ab濃度不可太高或太低，因為Ag-Ab結合需在一定濃度范圍內進行，若一方過剩則形成復合物小且少；極過剩時已形成的復合物亦會解體而呈現假陰性。——并非Ab濃度越高越好。3．Ab滴片技術——所滴的抗體應與切片上的組織剛好吻合。[注意]滴抗體前需把切片上的水弄干，但不能干片。要領：甩凈組織周圍的水。4．PBS洗滌技術（1）洗滌的目的①保證離子濃度和PH值。②減少非特異反應（平時Ab不可靠很純）（2）方法：洗三次，每次5分鐘。5．Ab孵育技術（1）必須在濕盒內進行，以防抗體的蒸發和干片。（2）溫度與時間4℃：過夜；37℃：2hor參考說明書6．光鏡控制顯色方法（1）室內操作：注意溫度與時間的關系，室溫較宜5分鐘。（2）染色稍淺亦可拿出，脫水，封片后顏色可加深。對照組和染色結果的評價從以下幾個方面綜合評價：1．陽性染色特點①Ag定位，胞漿、胞核、胞膜、間質具有結構性。（非特異性～細胞與組織無區別）②染色強度不同：顏色深淺不一。上海融享專注免疫組化服務。

酶消化法 常用的消化酶有胰蛋白酶、胃蛋白酶，應嚴格掌握好消化時間、溫度和濃度。胰蛋白酶使用濃度為0.05%～0.1%，消化溫度為37℃，消化時間為10～40**要用于細胞內抗原的顯示:胃蛋白酶使用濃度為0.4%，消化溫度為37℃，消化時間為30～180要用于細胞間質抗原的顯示，如:Laminin（層粘蛋白），Collagen IV（IV型膠原蛋白）等。熱修復法 現常用微波修復、高溫高壓修復、水浴加熱修復法。較常用的修復法是pH6.0枸櫞酸緩沖液。修復過程中的注意要點是:（1）達到規定的溫度（92℃～95℃以上）;（2）維持一定的時間，微波修復、水浴加熱須控制在10～15min，高溫高壓修復須控制在2min左右;（3）避免切片干涸，如果切片干涸，抗原則可能完全丟失;（4）加熱后必須經過室溫自然冷卻20～30min，使未折疊的蛋白分子鏈恢復天然構型。融享生物是免疫組化，切片技術服務商之一，從事轉錄組測序/mRNA測序已經多年。安徽免疫學免疫組化檢測機構

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    （1）ABC復合物的制備：（2）ABC法反應原理6．SP或SAP法（過氧化物酶標記的鏈霉卵白素或過氧化物酶標記的堿性磷酸酶染色）Streptavidin/peroxidaseorstrepta-vidin/alkalinephosphatase）※該法是ABC法基礎上的進一步改良，使卵白素與鏈霉（而非生物素）結合，而后再結合PO。它有4個亞基可與生物素結合，靈敏特異，背景低，成本低。現在還有plus盒。優點是：更簡便，放大倍數↑，等電點中性更適合組織。分子量小，穿透力↑。7．蛋白A—金法（Protein—Agoldmethod）~多用于電鏡8．雙重組化染色法應用雙重免疫組織化學可在同一張切片，同一細胞或亞細胞結構內同時顯示兩種不同的抗原。9．免疫金—銀染色法（Immunogold—silverstainingIGSS）固定——見前述注意事項：1．固定劑的選擇：因組織而不同，注意質量和性能。2．固定方式的選擇：①浸漬固定（參考文獻）②灌注固定（+后固定）③蒸汽固定免疫組化染色步驟（以ABC法為例）1．切片脫蠟入水，入PBS洗三次/15分鐘。2．封閉內源性過氧化物酶。用新配置的（在PAS或—HCL緩沖液）室溫，30分鐘。3．水洗，入PBS，洗三次，每次5分鐘。4．減少非特異性著色用稀釋20倍的正常血清（產生二次抗體動物血清?。覝?，30分鐘。上海組織免疫組化實驗服務