細胞增殖-毒性檢測1.在96孔板中配制100ml的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養24小時(在37℃，5%CO2的條件下)。2.向培養板加入10ml不同濃度的待測物質。3.將培養板在培養箱孵育一段適當的時間(例如:6,12,24或48小時)。4.向每孔加入10mlCCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響O.D值的讀數)。5.將培養板在培養箱內孵育1-4小時。6.用酶標儀測定在450nm處的吸光度。7.如果暫時不測定O.D值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10ml0.1MHCl溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24小時內吸光度不會發生變化。注意：如果待測物質有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8之前更換新鮮培養基，去掉***的影響。當然***影響比較小的情況可以不更換培養基，直接扣除培養基中加入***后的空白吸收即可。**藥敏試驗：這個是用的比較廣的，我見過做**的團隊，買CCK-8都是一整箱，一整箱的買。江蘇mtt與cck8的波長

在培養基中加入CCK8，培養一定的時間，測定450nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗時，還應考慮***的吸收，可在加入***的培養基中加入CCK8，培養一定的時間，測定450nm的吸光度作為空白對照。·金屬對CCK-8顯色有影響：當終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會***5%、15%、90%的顯色反應，使靈敏度降級。如果終濃度是10mM的話，將會*****。·懸浮細胞由于染色比較困難，一般需要增加細胞數量和延長培養時間。·加入CCK-8時，如果細胞培養時間較長，培養基顏色或pH值已變化，建議換用新鮮的培養基。·用酶標儀檢測前需確保每個孔內沒有氣泡，否則會干擾測定，且要擦拭干凈樣品板了。湖北96孔板cck8結果分析細胞增殖檢測——CCK8.

CCK-8的原理

所以粗略的可以認為生成的甲瓚物的顏色的深淺與活細胞的數量成正比。為什么是粗略的呢，因為這里沒有考慮到細胞代謝水平的高低，有些細胞在***處理后，可能活細胞數不變，但是代謝率低了以后，細胞呼吸減弱，NAD+產生減少，測出的Formazan也會減少，所以此時怎么算呢（此時我就比較懷戀中性紅了）？當然也有解決的辦法，下期給大家介紹。因此可利用這個原理進行細胞增殖和毒性分析，在吸光度為450時檢測讀數。用途及常用的公

7、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。24小時內測定，吸光度不會發生變化。注意：如果待測物質有氧化性或還原性的話，可在加CCK之前更換新鮮培養基（除去培養基，并用培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養基），去掉***影響。當然***影響比較小的情況下，可以不更換培養基，直接扣除培養基中加入***后的空白吸收即可。活力計算：保存條件：4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存兩年有效。***篩選：在測定一個***的毒性和安全有效濃度時，經常會用到CCK-8。

CCK-8沒有具體規定反應時間的長短，以具體反映比較好顯色的時間為主。因為不同的細胞反應時間、顯色標準都不一樣，所以一定要設置預實驗。預實驗中，可以先做幾個孔摸索一下接種數量和培養時間。3、懸浮細胞比貼壁細胞難顯色。在加入CCK-8培養后，可每隔一小時觀測一下顏色的變化情況，或者之間用酶標儀檢測更為準確。4、CCK8作用時間越長，OD值就越大，所以對于作用時間也不是越長久越好，要把OD值控制在1左右。5、CCK8要求檢測孔內不能有氣泡。這個CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8.北京cck8試劑

代謝率低了以后，細胞呼吸減弱，NAD+產生減少，測出的Formazan也會減少。江蘇mtt與cck8的波長

、***濃度的確定需要做一個時間梯度，鋪板和上述相同，只需把各個實驗組改成各個作用時間就可以了。至于說***濃度的確定，網上有很多確認方法，個人建議以IC50值作為***濃度即可。計算方法，某園子里都有，就不在這里介紹了。

MTT作用之后，一定要小心吸走培養液，以免將孔內的紫色結晶吸走。有條件的實驗室，這一步可以采用離心機將沉淀充分離心到孔底，防止被吸出。如果沒有這種類型的離心機，可以在測量吸光度的時候，將酶聯免疫的機器震蕩時間調制5分鐘，**起碼可以保證沉淀充分溶解。 江蘇mtt與cck8的波長