確定希望輸送的運載物(如DNA、RNA或蛋白質)根據不同實驗類型,我們可能需要將不同的運載物輸送到細胞內部,包括**常見的DNA,用于基因編輯的siRNA,能夠更快表達蛋白的mRNA,CRISPR-Cas9甚至是體內轉染。正確的了解您希望輸送的運載物是選擇可靠轉染產品的第一步。2希望轉染的細胞類型轉染的細胞類型可簡單分為兩大類,連續細胞系和原代細胞。連續細胞系具有無限增殖的潛能,通常要比原代或有限細胞更易處理。但由于此類細胞經歷過基因改變而變得具有無限增殖能力,它們在培養過程中的表現可能無法必然地反映體內狀態。采用siRNA轉染試劑可以將siRNA輕松導入細胞內。上海常用轉染試劑配方在選擇轉染...
ZetaLife轉染試劑成功轉染THP-1(人單核白血病細胞)懸浮細胞ZETALIFEZETALIFE微信號gh_97714b427409功能介紹美國ZetaLife公司是國際無血清細胞培養基DMEM/F12主要完成人,有三十多年的胎牛血清、無血清細胞培養基生產經驗;ZetaLife與美國加利福尼亞大學聯合開發全球細胞體內可代謝轉染試劑,此技術成為全球細胞轉染優先技術之一。7月17日收錄于話題ZetaLifeAdvancedDNARNA,AD600150轉染試劑;成功轉染THP-1(人單核白血病細胞)懸浮細胞;來自廣州中山大學附屬**醫院客戶的喜訊;出色的細胞轉染結果與您分享;24小時熒光圖片...
圖7.對注射了Invivofectamine3.0試劑的小鼠樣品進行血液化學分析。將Invivofectamine3.0試劑與靶向FVII的AmbioninvivosiRNA的復合物分別以1mg/kg[1],3mg/kg[3],或未處理[U]的劑量注射入小鼠體內。在注射后2、24及48小時收集血液樣品,并通過臨床化學檢測方法對數個生物標志物(Antech)進行評估。結果表明在使用Invivofectamine3.0試劑進行轉染的每個個體間所檢測的生物標志物的水平與未注射該試劑的個體相比并沒有***差異。除了以上兩種于siRNA的轉染試劑,還有通用型轉染試劑Lipofectamine?2000,...
原代細胞直接分離自組織并在適當條件下增殖。因此,它們的形態學和生理特征和體內狀態更為相似。但相對于連續細胞系,它們通常更難培養和轉染。在經過***次傳代培養之后,原代培養物變成了一種細胞系。源自于原代培養物的細胞系具有有限的壽命(即它們是有限細胞系),且隨著傳代的進行,具有比較高的生長能力的細胞逐漸占據支配地位,從而造成了細胞群內的基因型和表型接近一致的情形。相對來說,這一類細胞要比原代細胞使用起來更為方便,尤其是穩定轉染的克隆傳代。轉染的細胞類型可簡單分為兩大類,連續細胞系和原代細胞。腺病毒轉染試劑原理轉染產品知多少:轉染試劑選擇工具收錄于話題轉染是將核酸導入真核細胞中的過程,是細胞生物學、...
細胞轉染過程X-tremeGENE9DNA轉染試劑簡介:X-tremeGENE9DNA轉染試劑是脂質和其它成分混合而得的一類多組份試劑,溶于80%乙醇中,經0.2μm濾膜過濾,然后封裝于玻璃小瓶中,適用于細胞分析的多種實驗。優勢:1.具有細胞毒性極低、轉染后細胞存活率高,生成可信任的生理學相關數據。2.操作簡便、節省時間,只需對X-tremeGENE9DNA轉染試劑進行簡單稀釋,再與質粒DNA共同孵育,即可直接向細胞添加反應混合物(有無血清均可)。3.對于常用細胞無需進行費時費力的優化工作.臨床級******毒載體生產必備轉染試劑..動物轉染試劑推薦LNCap細胞的培養和傳代嚴格由ATCC建議...
原代細胞直接分離自組織并在適當條件下增殖,因此,它們的形態學和生理特征和體內狀態更為相似。但相對于連續細胞系,它們通常更難培養和轉染。在經過***次傳代培養之后,原代培養物變成了一種細胞系。源自于原代培養物的細胞系具有有限的壽命(即它們是有限細胞系),且隨著傳代的進行,具有比較高的生長能力的細胞逐漸占據支配地位,從而造成了細胞群內的基因型和表型接近一致的情形。相對來說,這一類細胞要比原代細胞使用起來更為方便,尤其是穩定轉染的克隆傳代。臨床級******毒載體生產必備轉染試劑..國產轉染試劑供應商用LipoFectMax?轉染Hela細胞,左圖轉染GFPcDNA,右圖共轉染GFPCDNA和GFP...
將膠質瘤干細胞(3105)接種至6孔板中,然后使用riboFECTCP轉染試劑分別將5μl20μMBMPER、CXCL10和HOXA9siRNA轉染進膠質瘤干細胞(DP3321、DP7857)中,48h后,qRT-PCR和westernblots檢測siRNA***效率。結果發現DP3321中的siBMPER、siCXCL10和siHOXA9表達水平分別為46.32%、49.71%和43.64%,DP7857中的siBMPER、siCXCL10和siHOXA9表達水平分別為53.21%、47.46%和46.31%。將1.25μlTREM-1siRNA(20μm)和3μlriboFECTTMCP...
簡介:X-tremeGENEHPDNA轉染試劑是一種高效的無動物源成分的低毒轉染試劑,兼容含血清或不含血清的培養基,可用于轉染各類真核細胞(包括昆蟲細胞)以及多種難轉染細胞系。優勢:1.簡單易用的多組分混合試劑,無動物源性成分,室溫穩定。2.高轉染效率,對于原代細胞和使用其它試劑難轉染的**細胞系有高轉染效率。3.使用細胞毒性低的試劑,結果相關性好。圖2.X-tremeGENEHP高效低毒的轉染性能。通過X-tremeGENEHP和脂質體轉染方法將GFP表達質粒轉染至CHO-K1。A和C圖的熒光視野顯示了實驗后兩種方法均獲得了成功轉染的細胞。但B和D圖的明亮視野表明脂質體轉染方法的細胞毒性遠高...
細胞轉染如果以上都沒有問題,那么******重要的環節就是慢***質粒轉染293T細胞了,轉染效果直接影響著出毒效率,那么一款好的轉染試劑在此時就是至關重要了!在這里給大家推薦一款性價比超高的轉染試劑,美國Polysciences家的PEIMAX40K!PEIMAX40K(也稱為游離堿PEI22K)是一種功能強大,值得信賴且經濟高效的瞬時轉染試劑。在HEK293和CHO表達系統中,能在96孔板至100L生物反應器范圍內提供始終如一高效的基因表達。越來越多的研究人員和公司使用PEI來替代其他類型轉染試劑,以獲得他們所需要的優勢。相較于其他類型轉染試劑,使用自行制備的PEI轉染試劑可以使總轉染成本...
圖5.Invivofectamine3.0試劑與靶向FVII的siRNA在單次靜脈注射后可在肝臟中引起劑量反應的敲低現象。Invivofectamine3.0試劑與靶向FVII的AmbioninvivosiRNA以0.02到2mg/kg的劑量進行注射。隨后分離血清并檢測FVII蛋白的水平(Biophen顯色檢測)。持續敲低能力在單次注射后可觀察到更長的敲低時間圖6.使用三種不同濃度的靶向FactorVII(FVII)的siRNA研究劑量效應。siRNA分子與Invivofectamine3.0試劑形成復合物后分別以1、0.5、及0.25mg/kg的劑量進行注射。在第2、5、9、16、23及30...
簡介:X-tremeGENEHPDNA轉染試劑是一種高效的無動物源成分的低毒轉染試劑,兼容含血清或不含血清的培養基,可用于轉染各類真核細胞(包括昆蟲細胞)以及多種難轉染細胞系。優勢:1.簡單易用的多組分混合試劑,無動物源性成分,室溫穩定。2.高轉染效率,對于原代細胞和使用其它試劑難轉染的**細胞系有高轉染效率。3.使用細胞毒性低的試劑,結果相關性好。圖2.X-tremeGENEHP高效低毒的轉染性能。通過X-tremeGENEHP和脂質體轉染方法將GFP表達質粒轉染至CHO-K1。A和C圖的熒光視野顯示了實驗后兩種方法均獲得了成功轉染的細胞。但B和D圖的明亮視野表明脂質體轉染方法的細胞毒性遠高...
基于陽離子聚合物的轉染試劑,帶正電的聚合物與核酸帶負電的磷酸基團形成帶正電的復合物后與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用,并通過內吞作用進入細胞。其又分為樹枝狀陽離子聚合物和線性陽離子聚合物兩類,前者細胞毒性相對較大,后者細胞毒性較小,但其轉染效率都高于脂質體轉染,適用也較為廣范。以上單一成分的轉染試劑或聚焦于提高效率或著重于降低細胞毒性,可謂魚和熊掌不可兼得也。新一代轉染試劑,不局限于單一成分,混合了不同配方的脂類(非脂質體)、加上蛋白質組分、以及各種的成分,兼具了轉染效率高和細胞毒性小的優勢,且操作更加簡單,易于高通量。一般會同時設置對照,對RNAi結果進行比較。RNAi的成功取決于正確導入...
.在多種不同類型細胞中基因敲除效率超過90%。高靈活應用,同一試劑可用于siRNA和質粒共轉染的基因沉默實驗。細胞毒性低,結果相關性好,確保所觀察到的細胞效應是由轉染的siRNA而非轉染過程本身介導。兼容含血清或不含血清的培養基,轉染前后均無需換液(如無血清培養基)。X-tremeGENEsiRNATransfectionReagent用于4種細胞系的HPRT基因沉默實驗。根據各試劑說明書建議的操作流程,或標準實驗方法,將100nMHPRT特異性siRNA轉染至4種細胞,通過LightCycler?h-HPRTHousekeepingGeneSet的熒光定量法評估基因沉默效率。結果顯示用羅氏這...
細胞轉染過程:X-tremeGENE9DNA轉染試劑簡介:X-tremeGENE9DNA轉染試劑是脂質和其它成分混合而得的一類多組份試劑,溶于80%乙醇中,經0.2μm濾膜過濾,然后封裝于玻璃小瓶中,適用于細胞分析的多種實驗。優勢:1.具有細胞毒性極低、轉染后細胞存活率高,生成可信任的生理學相關數據。2.操作簡便、節省時間,只需對X-tremeGENE9DNA轉染試劑進行簡單稀釋,再與質粒DNA共同孵育,即可直接向細胞添加反應混合物(有無血清均可)。3.對于常用細胞無需進行費時費力的優化轉染試劑實現了更高的有效***細胞/未轉染細胞比率,超過其他RNAi試劑。蛋白轉染試劑配方LNCap細胞的培...
基于陽離子聚合物的轉染試劑,帶正電的聚合物與核酸帶負電的磷酸基團形成帶正電的復合物后與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用,并通過內吞作用進入細胞。其又分為樹枝狀陽離子聚合物和線性陽離子聚合物兩類,前者細胞毒性相對較大,后者細胞毒性較小,但其轉染效率都高于脂質體轉染,適用也較為廣范。以上單一成分的轉染試劑或聚焦于提高效率或著重于降低細胞毒性,可謂魚和熊掌不可兼得也。新一代轉染試劑,不局限于單一成分,混合了不同配方的脂類(非脂質體)、加上蛋白質組分、以及各種的成分,兼具了轉染效率高和細胞毒性小的優勢,且操作更加簡單,易于高通量。國產轉染試劑制作原理是什么?上海陽離子聚合物轉染試劑哪種好確定希望輸送的...
.在多種不同類型細胞中基因敲除效率超過90%。高靈活應用,同一試劑可用于siRNA和質粒共轉染的基因沉默實驗。細胞毒性低,結果相關性好,確保所觀察到的細胞效應是由轉染的siRNA而非轉染過程本身介導。兼容含血清或不含血清的培養基,轉染前后均無需換液(如無血清培養基)。X-tremeGENEsiRNATransfectionReagent用于4種細胞系的HPRT基因沉默實驗。根據各試劑說明書建議的操作流程,或標準實驗方法,將100nMHPRT特異性siRNA轉染至4種細胞,通過LightCycler?h-HPRTHousekeepingGeneSet的熒光定量法評估基因沉默效率。結果顯示用羅氏這...
.在多種不同類型細胞中基因敲除效率超過90%。2.高靈活應用,同一試劑可用于siRNA和質粒共轉染的基因沉默實驗。3.細胞毒性低,結果相關性好,確保所觀察到的細胞效應是由轉染的siRNA而非轉染過程本身介導。4.兼容含血清或不含血清的培養基,轉染前后均無需換液(如無血清培養基)。圖4.X-tremeGENEsiRNATransfectionReagent用于4種細胞系的HPRT基因沉默實驗。根據各試劑說明書建議的操作流程,或標準實驗方法,將100nMHPRT特異性siRNA轉染至4種細胞。通過LightCycler?h-HPRTHousekeepingGeneSet的熒光定量法評估基因沉默效率...
.在多種不同類型細胞中基因敲除效率超過90%。高靈活應用,同一試劑可用于siRNA和質粒共轉染的基因沉默實驗。細胞毒性低,結果相關性好,確保所觀察到的細胞效應是由轉染的siRNA而非轉染過程本身介導。兼容含血清或不含血清的培養基,轉染前后均無需換液(如無血清培養基)。X-tremeGENEsiRNATransfectionReagent用于4種細胞系的HPRT基因沉默實驗。根據各試劑說明書建議的操作流程,或標準實驗方法,將100nMHPRT特異性siRNA轉染至4種細胞,通過LightCycler?h-HPRTHousekeepingGeneSet的熒光定量法評估基因沉默效率。結果顯示用羅氏這...
基于脂質體的轉染試劑包括中性脂質體和陽離子脂質體兩種。中性脂質體是利用脂質膜包裹DNA,借助脂質膜將DNA導入細胞膜內。目前應用比較***的是帶正電的陽離子脂質體轉染試劑,DNA并沒有預先包埋在脂質體中,而是帶負電的DNA自動結合到帶正電的脂質體上,形成DNA-陽離子脂質體復合物,從而吸附到帶負電的細胞膜表面,經過內吞被導入細胞。此方法操作簡單,重復性好,在體外轉染中有很高的效率,但具有一定的細胞毒性,可能會干擾細胞的代謝。且活性受血清影響,需要去除血清。誰來拯救我的細胞之QIAGEN轉染試劑.Opti-MEM轉染試劑購買用LipoD293?體外DNA轉染試劑(Ver.II)(上圖)和受歡迎的...
將膠質瘤干細胞(3105)接種至6孔板中,然后使用riboFECTCP轉染試劑分別將5μl20μMBMPER、CXCL10和HOXA9siRNA轉染進膠質瘤干細胞(DP3321、DP7857)中,48h后,qRT-PCR和westernblots檢測siRNA***效率。結果發現DP3321中的siBMPER、siCXCL10和siHOXA9表達水平分別為46.32%、49.71%和43.64%,DP7857中的siBMPER、siCXCL10和siHOXA9表達水平分別為53.21%、47.46%和46.31%。將1.25μlTREM-1siRNA(20μm)和3μlriboFECTTMCP...
原代細胞直接分離自組織并在適當條件下增殖,因此,它們的形態學和生理特征和體內狀態更為相似。但相對于連續細胞系,它們通常更難培養和轉染。在經過***次傳代培養之后,原代培養物變成了一種細胞系。源自于原代培養物的細胞系具有有限的壽命(即它們是有限細胞系),且隨著傳代的進行,具有比較高的生長能力的細胞逐漸占據支配地位,從而造成了細胞群內的基因型和表型接近一致的情形。相對來說,這一類細胞要比原代細胞使用起來更為方便,尤其是穩定轉染的克隆傳代。轉染試劑--總有一款你想要的.昆蟲細胞轉染試劑對照原代細胞直接分離自組織并在適當條件下增殖。因此,它們的形態學和生理特征和體內狀態更為相似。但相對于連續細胞系,它...
轉染產品知多少:轉染試劑選擇工具收錄于話題轉染是將核酸導入真核細胞中的過程,是細胞生物學、基因表達和基因***實驗中的關鍵步驟。不同的實驗方案和技術差別巨大,我們可以利用化學方法或脂質體將核酸(DNA或RNA)高效輸送到細胞內,也可以使用電穿孔方法利用電流在細胞膜上開孔,使核酸進入細胞內。賽默飛提供了多種高質量的轉染產品,適用于各種細胞類型的轉染。如何選擇**受信賴的可用于轉染的系統,是實驗結果的重要影響因素。轉染后6h觀察細胞狀態,并更換培養基,繼續培養24 h后收取細胞,用PBS洗滌3次以上,以備RNA抽提。上海體內轉染試劑選購LipofectamineRNAiMAX轉染試劑是先進、高效的...
基于陽離子聚合物的轉染試劑,帶正電的聚合物與核酸帶負電的磷酸基團形成帶正電的復合物后與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用,并通過內吞作用進入細胞。其又分為樹枝狀陽離子聚合物和線性陽離子聚合物兩類,前者細胞毒性相對較大,后者細胞毒性較小,但其轉染效率都高于脂質體轉染,適用也較為廣范。以上單一成分的轉染試劑或聚焦于提高效率或著重于降低細胞毒性,可謂魚和熊掌不可兼得也。新一代轉染試劑,不局限于單一成分,混合了不同配方的脂類(非脂質體)、加上蛋白質組分、以及各種的成分,兼具了轉染效率高和細胞毒性小的優勢,且操作更加簡單,易于高通量。并更換培養基,繼續培養24 h后收取細胞,用PBS洗滌3次以上,以備RN...
基于磷酸鈣成分的轉染試劑,其主要作用原理是與DNA通過沉淀反應形成磷酸鈣-DNA復合物,粘附到細胞膜表面,借助內吞作用進入細胞質。pH值,鈣離子濃度,DNA濃度,沉淀時間,細胞孵育時間乃至各組分加入順序都可能對結果產生影響,因此實驗條件摸索和優化時間較長,且重復性不佳。基于脂質體的轉染試劑包括中性脂質體和陽離子脂質體兩種。中性脂質體是利用脂質膜包裹DNA,借助脂質膜將DNA導入細胞膜內。目前應用比較***的是帶正電的陽離子脂質體轉染試劑,DNA并沒有預先包埋在脂質體中,而是帶負電的DNA自動結合到帶正電的脂質體上,形成DNA-陽離子脂質體復合物,從而吸附到帶負電的細胞膜表面,經過內吞被導入細胞...
轉染48小時后,使用尼康熒光顯微鏡GFP熒光進行成像(左側四幅圖),A:LipoD293;B:293fectin;C:Xfect和D:Fugene6.帶有6xHis標記的GFP熒光蛋白使用Ni-NTA親和柱技術實現分離。5微升洗脫液載入SDS-PAGE凝膠電泳分離并進行Coomassie亮藍染色(右上圖E),道1為LipoD293293、道2為標準蛋白分子、道3為Xfect、道4為293fectin和道5為Fugene6。這四種轉染試劑產生蛋白質的效率被進一步定量(見右下圖F)。產生慢***的比較通過LipoD293?試劑(升級版)和LipofectamineLTX(LTX)試劑將三個cDNA...
用LipoFectMax?轉染Hela細胞,左圖轉染GFPcDNA,右圖共轉染GFPCDNA和GFP靶向siRNA。轉染siRNA后可以從右圖明顯看到基因沉默。4適用于神經細胞的轉染圖4.用LipoFectMax?和LipoFectamine?2000分別對小鼠神經元細胞進行轉染綠色熒光白蛋白(GFP),轉染24小時后觀察轉染效果,LipoFectMax?轉染效率(左圖)比LipoFectamine?2000(右圖)高5倍。LipoFectMax?轉染試劑轉染試劑操作流程細胞毒性低圖2.LipoFectMax?,LipoFectamine?2000及LipoFectamine?3000分別對A...
.在多種不同類型細胞中基因敲除效率超過90%。高靈活應用,同一試劑可用于siRNA和質粒共轉染的基因沉默實驗。細胞毒性低,結果相關性好,確保所觀察到的細胞效應是由轉染的siRNA而非轉染過程本身介導。兼容含血清或不含血清的培養基,轉染前后均無需換液(如無血清培養基)。X-tremeGENEsiRNATransfectionReagent用于4種細胞系的HPRT基因沉默實驗。根據各試劑說明書建議的操作流程,或標準實驗方法,將100nMHPRT特異性siRNA轉染至4種細胞,通過LightCycler?h-HPRTHousekeepingGeneSet的熒光定量法評估基因沉默效率。結果顯示用羅氏這...
胞因素用低代數的細胞293T細胞非常重要!!當然也要保證細胞狀態特別好,沒有細微污染,鋪板均勻。飽滿狀態好的細胞才可以產生較高滴度的***哦!載體系統在實驗中**常見的慢***載體系統有三質粒系統、四質粒系統,當然使用三質粒系統的小伙伴居多,一定要選擇成熟商業化的載體系統!載體構建和質粒抽提純化我們要注意是否構建時導致質粒載體重組或某個部件缺失,或污染別的質粒、雜物?中抽純化是否污染?要養成同時做陰性對照的習慣:建議目的基因載體和陰性對照GFP載體是同一批,且建議每次包裝都如此操作,要保證目的基因的表達載體構建純化良好,質粒間比例得當,并且對質粒進行酶切驗證。將EntransterTM-R40...
原代細胞直接分離自組織并在適當條件下增殖。因此,它們的形態學和生理特征和體內狀態更為相似。但相對于連續細胞系,它們通常更難培養和轉染。在經過***次傳代培養之后,原代培養物變成了一種細胞系。源自于原代培養物的細胞系具有有限的壽命(即它們是有限細胞系),且隨著傳代的進行,具有比較高的生長能力的細胞逐漸占據支配地位,從而造成了細胞群內的基因型和表型接近一致的情形。相對來說,這一類細胞要比原代細胞使用起來更為方便,尤其是穩定轉染的克隆傳代...質粒細胞轉染步驟是什么?體內轉染試劑原理轉染是將外源核酸導入真核細胞的過程,是細胞和分子生物學研究的重要工具,也是大部分的生物和分子生物領域的科研黨們繞不開的...
細胞轉染如果以上都沒有問題,那么******重要的環節就是慢***質粒轉染293T細胞了,轉染效果直接影響著出毒效率,那么一款好的轉染試劑在此時就是至關重要了!在這里給大家推薦一款性價比超高的轉染試劑,美國Polysciences家的PEIMAX40K!PEIMAX40K(也稱為游離堿PEI22K)是一種功能強大,值得信賴且經濟高效的瞬時轉染試劑。在HEK293和CHO表達系統中,能在96孔板至100L生物反應器范圍內提供始終如一高效的基因表達。越來越多的研究人員和公司使用PEI來替代其他類型轉染試劑,以獲得他們所需要的優勢。相較于其他類型轉染試劑,使用自行制備的PEI轉染試劑可以使總轉染成本...