在做一些***毒性試驗時，比如做鐵死亡途徑時，我們加入一個***叫C1，這個時候就需要提前換液，其實我們試過，還是會有一些影響。所以這時我們用中性紅檢測。我們實驗室，通常會用20%的硫酸銅溶液放到細胞孵箱下層，預防******。理應說，硫酸銅分子在水溶液中是硫酸根離子和銅離子，是不會揮發的。但是每次只要是新換的硫酸銅溶液再做CCK-8，結果總是不好，我也不知道是什么原因。之前在我們實驗室有發生過這樣的事情，這種有深有淺的才是該有的結果。我想說的是在有能力選擇范圍內，盡量選擇好一點的試劑，免得浪費時間。將她培養板在培養箱內孵育1-4小時。湖北cck8步驟

培養基對CCK8測定的影響：不同的培養基中含有氧化還原性物質不同，（主要是氨基酸的成分及糖含量），會與CCK8發生反應，產生實驗誤差，因此所用培養基要一致，不要更換其他培養基。比如DMEM空白吸收為0.93；1640培養基在0.5左右。另外培養基中有酚紅存在的情況下，會增加空白吸收，但不影響測定，扣除空白吸收即可，可見空白孔非常重要，所以每次實驗均要設定空白對照。另外，血清不影響測定，所以我用CCK-8來測定病毒對細胞活性的影響或者某個***對病毒復制的影響時，我都小心翼翼的測很多個時間點，說實話，效果不是很好。所以我比較喜歡中性紅。湖北cck8 注意事項CCK8原理、優勢和步驟.

細菌***對CCK8檢測的影響：我們做***的，經常會做到細菌或***對細胞的影響。那這種情況下我們應該怎么辦。其實細菌防御系統還是非常強大，單獨和CCK-8在一起孵育時，不會發生還原反應，幾乎不會和細菌發生顯色反應。而細菌不需要入胞繁殖，所以結果還是可信的。**討厭的就是***，我不知道有多少人是做***的。***是需要入胞繁殖的，而且需要借助細胞的東西來進行繁殖。繁殖過程中就需要消耗宿主的能量，會產生氧化還原反應，所以我用CCK-8來測定***對細胞活性的影響或者某個***對***復制的影響時，我都小心翼翼的測很多個時間點，說實話，效果不是很好。所以我比較喜歡中性紅。

制作標準曲線1.先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量，然后接種細胞。2.按比例(例如：1/2比例)依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做3-5個細胞濃度梯度，每組3-6個復孔。3.接種后培養2-4小時使細胞貼壁，然后加CCK-8試劑培養一定時間后測定O.D值，制作出一條以細胞數量為橫坐標(X軸)，O.D值為縱坐標(Y軸)的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量(使用此標準曲線的前提條件是實驗的條件要一致，便于確定細胞的接種數量以及加入CCK-8后的培養時間)。細胞增殖與毒性檢測實驗方法及經驗總結-CCK-8 法.

CCK法的操作步驟（更多內容請見說明書）：實驗一：細胞活性檢測1、在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養板放在培養箱中預培養（37℃,5%CO2）。2、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數）。3、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。4、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。5、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。24小時內測定，吸光度不會發生變化。在CCK-8試劑盒中，**主要的化學藥品是WST-8.天津cck8細胞增殖數據處理

細胞毒性測定：這個可以和各個處理因素對細胞活性和增殖的影響，比如低氧或者什么化學物品對細胞的影響上。湖北cck8步驟

二、優點：·使用方便，省去了洗滌細胞，不需要放射性同位素和有機溶劑；·CCK-8法能快速檢測；·CCK-8法的檢測靈敏度很高，甚至可以測定較低細胞密度；·CCK-8法的重復性優于MTT法，MTT實驗生成的formazan不是水溶性的，需要使用DMSO等有機溶劑溶解；而本方法產生的formazan是水溶性的，不但省去了溶解步驟，更因此而減少了該操作步驟帶來的誤差；·CCK-8法對細胞毒性小，可以多次測定選取比較好測定時間，與MTT方法相比線性范圍更寬，靈敏度更高；·CCK-8細胞活性檢測試劑中為1瓶溶液，毋需預制，即開即用。湖北cck8步驟