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無血清細胞凍存液的使用方法及注意事項：無血清細胞凍存液：含多種保護劑成分,一些保護劑,易于穿透細胞,避免細胞內部水分子形成冰晶損傷細胞,同時另一些保護劑不能穿透細胞,但可以在冰晶形成之前,優(yōu)先結合細胞外的水分子,降低細胞外溶液的電解質濃度,減少陽離子進入細胞的...

總RNA提取試劑試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如，從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色，可見許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分)，兩條優(yōu)勢核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S...

無血清細胞凍存液，通用于各種動物細胞株。特別配方具有有效提高細胞凍存活率和復蘇活力。不含動物來源性蛋白，能減少各類細菌、霉菌和支原體等的污染，確保凍存細胞安全。既適用于一般培養(yǎng)細胞的凍存，也適用于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞的凍存。高安全性，完全使用醫(yī)藥品等級...

提取RNA的詳細步驟：首先，將研缽晾干夠，倒入1/3體積的液氮，加入0.2g均質的植物材料，充分研磨后轉入一個含有300微升GMT的1.5ml的離心管中，搖勻。然后，加入30微升2mol/lNaAc進行搖勻，加入300微升酸酚搖勻，加入100微升的氯仿搖勻。然...

游離RNA(或稱循環(huán)RNA,cell-freeRNA,簡稱cfRNA),即存在于細胞外的轉錄產物,包括mRNA和RNA,在人的多種體液中被普遍研究并成為疾病無創(chuàng)性診斷和研究的新分子標志物。文獻總結了以下兩個方面，一方面游離RNA主要來源于tumour細胞，另一...

外泌體因諾貝爾醫(yī)學獎而被眾人知曉，也因其作為生命信息傳遞者，在體液中普遍存在及易獲得性等特點被譽為液體活檢"新貴"，成為疾病的精確診斷和治病研究的熱點，尤其是在一些病癥研究領域[。外泌體作為細胞間通信載體的作用現在已被普遍接受。外泌體包含胞質環(huán)境中富含的DNA...

RNA提取試劑的選擇：選擇合適的提取試劑是較重要的一步。好的提取試劑在確保成功的同時，操作方便且經濟實用。對于動物組織、簡單的植物材料、各種微生物、培養(yǎng)細胞的totalRNA提取，Takara公司的RNAisoPlus具有諸多的成功案例。隨著2013年7月柱型...

與DNA不同，RNA一般為單鏈長分子，不形成雙螺旋結構，但是很多RNA也需要通過堿基配對原則形成一定的二級結構乃至三級結構來行使生物學功能。RNA的堿基配對規(guī)則基本和DNA相同，不過除了A-U、G-C配對外，G-U也可以配對。在細胞中，根據結構功能的不同，RN...

RNA提取注意事項：所有實驗所用的泵頭、離心管等消耗品均要使用RNase-free的；整個過程要在無RNase污染的條件下進行，通常可以在無菌操作臺中進行實驗，并用75%的酒精進行擦拭殺菌，如有必要也可在實驗前噴灑一些商用的RNase壓制劑；所有相關溶液的配制...

RNA指的是核糖核酸。真核生物體的遺傳物質存在于細胞核內，多數的真核生物使用DNA也就是脫氧核糖核酸來作為遺傳的中心物質，但是少量的病菌遺傳物質可以是RNA。正因為病菌的遺傳物質是RNA，所以可以通過檢測病菌的RNA是否存在，或者其濃度和含量來判斷是否存在相應...

外泌體的提取分離：1、超速離心法（差速離心）。超離法是常用的外泌體純化手段，采用低速離心、高速離心交替進行（如圖所示），可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單，獲得的囊泡數量較多而廣受歡迎，但過程比較費時，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉子類型有關），純度也受到...

凍存細胞注意事項：凍存細胞系以備將來之用時，必須遵守以下原則。我們建議您嚴格遵守您所用細胞系附帶的操作說明，以便獲得較佳結果。在細胞處于生長期密度達到70-90%的情況下進行培養(yǎng)細胞的凍存，并且細胞傳代盡可能靠前。確保凍存前活細胞百分比至少為90%。請注意較佳...

將濃縮液加至20mmol/LTris/30%蔗糖/45%蔗糖(pH7.4)的密度梯度液上行4℃超速離心100000×g(水平轉子SW-41)8h,吸取位于蔗糖之上的顏色明顯較深條帶的液體約5mL,以10倍PBS稀釋混勻后再次用100-ku超濾離心管(Milli...

為了能夠從小鼠身上提取足夠的DNA，要從它們身上取下足量的細胞用于實驗。為了盡可能減少對動物的傷害和方便試驗人員的操作，剪下一小段鼠尾是一個不錯的選擇。就讓我們來盤點一下「耗子尾汁」的三種用法↓↓↓鼠尾取血剪下幾毫米小鼠尾巴、在小鼠尾靜脈上劃一道小口、用注射器...

超快速多糖多酚植物RNA提取試劑盒：無DNA污染，可直接反轉錄，熒光定量，不會出現洗脫液含絡合Mg離子成分，壓制后續(xù)PCR反應的情況。本試劑盒提取的RNA可直接用于對前期RNA提取質量非常高的后續(xù)實驗，如轉錄組RNA測序，制作基因芯片，熒光定量PCR，核酸雜交...

細胞凍存注意事項：1、細胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml－15m培養(yǎng)液，而在我的試驗中的經驗總結為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。2、復蘇細胞分裝的問題：試驗中我的經驗總結為復蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中，分裝過多，細胞濃...

RNA提取試劑TRIpure是基于世界上使用較普遍的異硫氰酸胍/酚法研制而成的總RNA抽提試劑。在破碎和溶解細胞時能保持RNA的完整性。無論是人、動物、植物還是細菌組織，該方法對少量的組織(50-100mg)和細胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細胞(...

細胞凍存液的原理及配制方法：細胞凍存是細胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實驗順利進行的重要技術手段。在細胞建株和建系中，及時凍存原始細胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過程中，雜交瘤細胞、每次克隆化得到的亞克隆細胞的凍存保種常常是必不可少的實驗操作。因為在沒有建...

外泌體的提取方法：1、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽...

細胞質和細胞核RNA提取試劑盒特點：1.有效分離和提取細胞質RNA，與細胞核RNA。2.方便快捷的離心柱操作方式。3.提取的RNA，品質高，產量多。4.試劑盒不含苯酚，可提取所有RNA（含RNA）。5.純化的RNA可用于任何應用，包括RT-PCR，qRT-PC...

膠原蛋白的提取方法：1.堿法提取：堿法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉、碳酸鈉等。如Holzer等[5]采用1%～1.5%石灰水浸泡的方法提取膠原蛋白。由于它容易造成肽鍵水解，因此得到的水解產物分子量比較低。所以，若想保留膠原的三股螺旋結構，此法不可取...

外泌體相關miRNA與肺病的診斷：miRNAs是一類含有20～25個核苷酸的非編碼小RNA，能夠通過下調或壓制靶mRNAs來調節(jié)轉錄水平上的基因表達，目前非編碼RNA被普遍發(fā)現存在于NSCLC患者外泌體中，參與一些病癥的形成和演化過程。單個miRNA可能通過壓...

鼠尾膠原實驗應用：探討應用鼠尾膠原在豚鼠前庭毛細胞膜片鉗實驗中的促進毛細胞貼壁效果。方法制作鼠尾膠原，觀察全細胞膜片鉗實驗中，自制的鼠尾膠原對前庭毛細胞的貼壁黏附作用。結果無鼠尾膠原時，前庭毛細胞懸浮于外液，不宜封接；有鼠尾膠原時，前庭毛細胞貼附于培養(yǎng)皿底壁，...

RNA提取濃度不高或質量不佳原因及解決辦法：1、RNA降解：可能是提取樣本本身降解，或者是在提取過程中導致的降級；應當盡可能使用新鮮樣本進行RNA提取，采集的樣本應當及時置于液氮或者-80℃冰箱凍存，并減少反復凍融。在RNA提取過程中應當使用RNase/DNa...

細胞凍存液常見問題：1.從繁衍期到產生高密度的單層細胞之前的塑造體細胞都能夠用以凍存，但較好是為多數成長期體細胞。在凍存前一日較好是換一次細胞培養(yǎng)液;2.將凍存管放進液氮容器或從這當中取下時，要搞好安全防護工作中，以防凍壞;3.凍存和再生較好用新配置的細胞培養(yǎng)...

由歐洲多國細胞外囊泡領域的學者發(fā)起并成立的國際細胞外囊泡協會（ISEV）于2014年在協會會刊JournalofExtracellularVesicles發(fā)表了一個指導性意見，也就是我們常說的MISEV2014。2018版《指導要求》進行了修訂。2018版的《...

動物細胞RNA提取：1、懸浮細胞：可直接離心后棄掉培養(yǎng)基，用無菌PBS清洗1~2遍后，再用適量PBS懸浮起來，然后再加入裂解液進行裂解。千萬不要完全棄掉液體后，往沉淀細胞里直接加入裂解液，這樣會使外表層的細胞裂解后釋放的組蛋白包裹粘附在沉淀細胞外側，從而限制沉...

外泌體的形成與鑒定：首先，細胞膜內陷形成一個杯狀結構，包括細胞表面蛋白和與細胞外環(huán)境相關的可溶性蛋白，導致早期胞內體(early-sortingendosome，ESE)的從頭形成，或者是杯狀結構直接和已經存在的ESEs融合；trans-高爾基體和內質網也能協...

由歐洲多國細胞外囊泡領域的學者發(fā)起并成立的國際細胞外囊泡協會（ISEV）于2014年在協會會刊JournalofExtracellularVesicles發(fā)表了一個指導性意見，也就是我們常說的MISEV2014。2018版《指導要求》進行了修訂。2018版的《...

外泌體相關技術在過去幾年一直在快速發(fā)展，預計市場將大幅增長，因為它們可被應用到液體活檢、精細醫(yī)學和再生醫(yī)學領域。特別是，一些疾病衍生的外泌體通過調節(jié)血管生成、轉移和免疫來影響細胞的侵襲性，使其成為用于一些疾病檢測、診斷和治病選擇的極其有用的生物標志物來源。在風...